高效液相色谱法测定朝鲜淫羊藿街中淫羊藿甙的含量沙明曹爱民杨松松（辽宁中医学院沈阳１１００３２）薛雅民（大连石化公司职工医院大连１１６０３２）提要采用高效液相色谱法测定朝鲜淫羊藿中淫羊藿甙的含量，色谱柱为Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＣＬＣ－ＯＤＳ柱，流动相为乙腈－水（３０：７０），检测波长２７０ｎｍ。在此条件下，淫羊藿甙与其它黄酮醇甙的色谱峰分离完全。方法回收率为９７．６％，ＲＳＤ为１．２％，操作简便，结果可靠，为淫羊藿药材的质量控制提供了新的方法。关键词分类号高效液相色谱法，朝鲜淫羊藿，淫羊藿甙Ｏ６５８／Ｒ９３１前言淫羊藿为常用中药，含有多种化学成分，主要为黄酮醇类化合物。常以淫羊藿甙为指标性成分控制其质量。淫羊藿中淫羊藿甙含量的测定方法有药典速１ｍＬ／ｍｉｎ。２．３标准曲线精确称定淫羊藿甙对照品２．００ｍｇ，置于２５ｍＬ容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，使对照品溶液浓度为０．０８ｇ／Ｌ。精确吸取对照品溶液１．０，２．０，３．０，法（薄层－紫外分光光度法）（１）、薄层扫描法、高效液相色谱法（２）。本文采用高效液相色谱法测定了朝鲜淫羊藿中淫羊藿甙（ｉｃａｒｉｉｎ）的含量，方法回收率为４．０，５．０μ蘈Ｌ注入高效液相色谱仪中，以进样量为横坐标、色谱峰面积为纵坐标作图，得回归方程为Ｙ＝１５２×１０４Ｘ－１．７×１０４，ｒ＝０．９９９８。进样量在０．０８９７．６％，ＲＳＤ为１．２％，操作简便、结果准确。本文作者在朝鲜淫羊藿的化学成分研究中，分离得到了除淫羊藿甙外的其它３个黄酮醇甙，经理化检测和光谱～０．４μｇ范围内线性关系良好。２．４样品测定精确称定朝鲜淫羊藿的干燥粉末０．５ｇ，置５０ｍＬ圆底烧瓶中。加３０％乙腈的水溶液２５ｍＬ，置水浴上分析确定为ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ａ，ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ｂ和ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ｃ，与国外文献报道一致（３），并在本文的实验条件下的色谱峰中得以确认，且色谱峰相互分离完全。国内尚无报道。回流提取３０ｍｉｎ。放冷，取上清液置５０ｍＬ容量瓶中。残渣加３０％乙腈的水溶液提取２次（每次１０ｍＬ，回流时间１５ｍｉｎ），提取液并入５０ｍＬ容量瓶中，加３０％乙２实验部分２．１仪器与试剂仪器ＬＣ－６Ａ高效液相色谱仪（日本岛津），腈的水溶液至刻度。经微孔滤膜（０．５μｍ）过滤，精确吸取样品液３μ蘈Ｌ，注入高效液相色谱仪中，测定其中淫羊藿甙的色谱峰面积，用外标法计算样品中淫羊藿甙的含量。淫羊藿甙含量平均值为０．４８％，ＲＳＤ为１．３％（ｎ＝５）。ＳＰＤ－６ＡＶ可见－紫外检测器，Ｃ－Ｒ３Ａ色谱数据处理机，ＳＩＬ－６Ａ自动进样器。试剂淫羊藿甙对照品由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。朝２．５回收率实验精确称定样品干燥粉末０．５ｇ，加入淫羊藿甙对照品溶液一定量，按２．４步骤制备样品液并进行含量测定。加样测定回收率的平均值为９７．６％，ＲＳＤ为１．２％（ｎ＝５）。鲜淫羊藿于１９９２年９月１５日采自辽宁省本溪草河口地区，经本院中药系植物教研室郑太坤教授鉴定为ｅｐｍｅｄｉｕｍ ｋｏｒｅａｎｕｍ ｎａｋａｉ。３讨论（１）朝鲜淫羊藿为中国药典１９９０年版一部收载的５种药用淫羊藿之一。药典规定淫羊藿中淫羊藿甙２．２色谱条件色谱柱为Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＣＬＣ－ＯＤＳ（６．０ｍｍ×１５０ｍｍ），流动相为乙腈－水（３０７０），柱温２５，流本文收稿日期：１９９５－１１－０２，修回日期：１９９５－１２－２５含量应不低于１％ァ。本文曾采用药典法测定，淫羊藿甙含量平均值为１．２％，而在本实验条件下测定的淫羊藿甙含量平均值为０．４８％，淫羊藿甙色谱峰与其它组分色谱峰分离度大于１．５（见图１）。我们认为高效液相色谱法优于药典采用的薄层－紫外分光光度法。（２）淫羊藿定Ａ、淫羊藿定Ｂ和淫羊藿定Ｃ都是三糖甙，极性大于淫羊藿甙。在本实验的色谱条件下，用分离得到的化合物确认色谱峰１，２，３分别为ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ａ，ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ｂ和ｅｐｉｍｅｄｉｎ Ｃ。出峰顺序与化合物极性相吻合，为淫羊藿质量研究提供了定性依据。４个黄酮醇甙的化学结构如下：参考文献１中国药典（一部）．北京：人民卫生出版社，１９９０：２９１２沙振方，孙文基．药物分析杂志，１９８８；８（６）：３４１３ Ｙｏｓｈｉｔｅｒｕ Ｏ，Ｍａｋｉ Ｏ，Ｈｉｒｏｓｈｉ Ｈ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１９８７；２６（４）：９３５Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｃａｒｉｉｎ ｉｎ Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ ＫｏｒｅａｎｕｍＮａｋａｉ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＳｈａ Ｍｉｎｇ，Ｃａｏ Ａｉｍｉｎ ａｎｄ Ｙａｎｇ Ｓｏｎｇｓｏｎｇ（Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，１１００３２）Ｘｕｅ Ｙａｍｉｎ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｄａｌｉａｎ Ｐｅｔｒｏ－Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｄａｌｉａｎ，１１６０２３）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｃａｒｉｉｎ ｉｎ ｅｐｍｅｄｉｕｍ ｋｏｒｅａｎｕｍ ｎａｋａｉ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅ－ｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．６％ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｗａｓ １．２％．Ａｂｏｕｔ ０．５ｇ ｏｆ ｄｒｉｅｄ ｐｏｗｄｅｒｅｄ ｃｒｕｄｅ ｄｒｕｇ ｗａｓ ｗｅｉｇｈｅｄ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ，ｐｌａｃｅｄ ｉｎ ２５ｍＬ ｏｆ ｔｈｅｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｎｄ ｒｅｆｌｕｘｅｄ ｏｎ ａ ｗａｔｅｒ－ｂａｔｈ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ．Ａｆｔｅｒ ｃｏｏｌｉｎｇ，ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｃａｎｔｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅ ｗａｓｒｅｆｌｕｘｅｄ ｔｗｉｃｅ ｗｉｔｈ １０ｍＬ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ ｐｌａｃｅｄ ｉｎ ａ ５０ｍＬ ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ｆｌａｓｋ ａｎｄ ｄｉｌｕｔｅｄｔｏ ５０ｍＬ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ａ ３ 蘈μＬ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ．Ｌｉｎｅａｒ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｇｒａｐｈｓ ｆｏｒ ｉｃａｒｉｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ０．０８－０．４μｇ．ＨＰＬＣ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｗａｓ Ｓｈｉ－ｍａｄｚｕ ＬＣ－６Ａ ｗｉｔｈ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ＳＰＤ－６ＡＶ；ａｔ ２７０ｎｍ ａｎｄ ａｕｔｏ ｉｎｊｅｃｔｏｒ ＳＩＬ－６Ａ．Ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（７０：３０）ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＣＬＣ－ＯＤＳ ｃｏｌｕｍｎ（６．０ｍｍ×１５０ｍｍ）．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ ｋｏｒｅａｎｕｍ ｎａｋａｉ，ｉｃａｒｉｉｎ