细胞培养基及其配制方法

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 无水氯化钙 .2H 2 265.00 18 O 硝酸铁 .9H 2 O 0.10 19 氯化钾 400.00 20 无水硫酸镁 97.67 21 氯化钠 6400.00 22 无水磷酸二氢钠 109.00 23 丁二酸 75.00 24 丁二酸钠 100.00 25 L-盐酸精氨酸 84.00 26 L-盐酸胱氨酸 63.00 27 甘氨酸 30.00 28 L-盐酸组氨酸 42.00 29 L-异亮氨酸 105.00 30 L-亮氨酸 105.00 31 L-盐酸赖氨酸 146.00 32 L-甲硫氨酸 30.00 33 L-苯丙氨酸 66.00 化合物名称 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸 L-缬氨酸 D-泛酸钙 酒石酸胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 含量 (mg/L) 42.00 95.00 16.00 72.00 94.00 4.00 7.20 4.00 7.20 4.00 0.40 4.00 4.00 1000.00 110.00 9.30.00 DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 无水氯化钙 1 200.00 17 2 硝酸铁 .9H 2 O 0.10 18 氯化钾 3 400.00 19 无水硫酸镁 4 97.67 20 氯化钠 5 6400.00 21 无水磷酸二氢钠 6 125.00 22 L-盐酸精氨酸 7 84.00 23 L-盐酸胱氨酸 8 63.00 24 L-谷氨酰胺 9 584.00 25 甘氨酸 10 30.00 26 L-盐酸组氨酸 11 42.00 27 L-异亮氨酸 12 105.00 28 L-亮氨酸 13 105.00 29 L-盐酸赖氨酸 14 146.00 30 L-甲硫氨酸 15 30.00 31 L-苯丙氨酸 16 66.00 32 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸钠盐 L-缬氨酸 D-泛酸钙 氯化胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 化合物名称 含量 (mg/L) 42.00 95.00 16.00 104.00 94.00 4.00 4.00 4.00 7.20 4.00 0.40 4.00 4.00 4500.00 110.00 15.00 含量 (mg/L) DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 无水氯化钙 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 L-谷氨酰胺 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 L-盐酸赖氨酸 L-甲硫氨酸 L-苯丙氨酸 200.00 0.10 400.00 97.67 6400.00 125.00 84.00 63.00 584.00 30.00 42.00 105.00 105.00 146.00 30.00 66.00 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸钠盐 L-缬氨酸 D-泛酸钙 氯化胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 42.00 95.00 16.00 104.00 94.00 4.00 4.00 4.00 7.20 4.00 0.40 4.00 4.00 1000.00 110.00 15.00 【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项 配制方法： （1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 （3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。

●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。

●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。

●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。

DMEM各种成分都有什么作用

一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。

（6）除了以上与细胞生长有关的物质以外，培养基中一般还要加入酚红（当溶液酸性时pH小于6.8呈黄色；当溶液碱性时pH大于8.4呈红色），一种pH指示剂。