中国现代医药杂志２０１３年４月第１５卷第４期ＭＭＪＣ，Ａｐｒ ２０１３，Ｖｏｌ １５，Ｎｏ．４ ・４３・ 荧光定量ＰＣＲ在一期梅毒诊断中的应用 刘小文 欧阳冬英 【摘要】 目的评价荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ—ＰＣＲ）在一期梅毒诊断中的应用。方法采用ＦＱ—ＰＣＲ检测８２例疑似一期梅 毒和２８例非梅毒性传播疾病（ＳＴＤ）患者的分泌物和血清、３１例非梅毒患者和２０例健康人血清中梅毒螺旋体（Ｔｐ）ＤＮＡ，同 时用ＴＲＵＳＴ、ＴＰ—ＥＬＩＳＡ、ＴＰＰＡ法检测所有待测者血清抗Ｔｐ或反应素抗体；比较分析检测结果的敏感性和特异性。结果 ＦＱ—ＰＣＲ检测疑似一期梅毒患者分泌物的阳性率最高（８６．６％），高于ＴＰ—ＥＬＩＳＡ（７０．７％）（Ｐ＜０．０５）、ＴＰＰＡ（７４－４％）（Ｐ＜０．０５）、 ＴＲＵＳＴ（５６．１％）（Ｐ＜０．叭）和ＦＱ—ＰＣＲ检测血清的阳性率（１７．１％）（Ｐ＜０．０１）。ＦＱ—ＰＣＲ的特异性与ＴＰＰＡ相同，均为１００％： ＴＲＵＳＴ检测ＲＡ、ＳＬＥ和肺结核患者的假阳性较高，分别为３０．０％、２５．０％和２２．２％。结论观、可定量和自动化的优点，是诊断一期梅毒的理想方法，以分泌物作为标本适宜。 ＦＱ—ＰＣＲ法具有敏感、特异、客 【关键词】梅毒螺旋体一期梅毒 荧光定量ＰＣＲ血清学方法 Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ Ｌｉｕ Ｘｉａｏｗｅｎ，Ｏｕｙａｎｇ Ｄｏｎｇｙｉｎｇ．Ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ Ｈｏｓｐｉｔｌａ ｏｆＪｉｎｇｄｅｚｈｅｎ，Ｊｉｎｇｄｅｚｈｅｎ ３３３０００ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｐｒｉ— ｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＦＱ－ＰＣＲ，Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（Ｔｐ）ＤＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｅｒａ ｆｒｏｍ ８２ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ，２８ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｎ—ｓｙｐｈｉｌｉｃ ｓｅｘｕａｌｌｙ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ（ＳＴＤ）ｐａｔｉｅｎｔｓ，３１ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｎ－ ｓｙｐｈｉｌｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ２０ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ａｎｔｉ－Ｔｐ ｏｒ ｒｅａｇｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｅｒａ ｆｒｏｍ ａｌｌ ｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＲＵＳＴ．ＴＰ－ＥＬＩＳＡ ａｎｄ ＴＰＰＡ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ａｎａｌ— ｙｓｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ＦＱ－ＰＣＲ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ（８６．６％）ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｈａｎ ＴＰ—ＥＬＩＳＡ（７０．７％）（Ｐ＜０．０５），ＴＰＰＡ（７４．４％）（Ｐ＜０．０５），ＴＲＵＳＴ（５６．１％）（Ｐ＜ ０．０１）ａｎｄ ＦＱ－ＰＣＲ（ｉｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｓｅｒｕｍ）（１７．１％）（Ｐ＜０。０１）．ＦＱ－ＰＣＲ ｈａｄ １００％ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ＴＰＰＡ；ＴＲＵＳＴ ｒｅ— ｖｅａｌｅｄ ｈｉｇｈｅｒ ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＲＡ（３０％），ＳＬＥ（２５％）ａｎｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ（２２．２％）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＦＱ－ＰＣＲ ｉｓ ａｎ ｉｄｅａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｐｅｃｉｉｆｃ，ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ，ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ａｕｔｏｍｏｔｉｖｅ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｐｒｉｍａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ 梅毒是一种由梅毒螺旋体（Ｔｐ）引起的严重危害 成人和新生儿健康的性传播疾病（ＳＴＤ），我国梅毒 方法，但此类方法对一期梅毒的敏感性低［４１。本研究 评价实时荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ—ＰＣＲ）在一期梅毒诊断 中的应用，现将结果报道如下。 发病数已多年超过淋病而居ＳＴＤ首位，其中先天性 梅毒【１］和男一男同性接触伴艾滋病性梅毒病例数近年 增长呈直线上升趋势［２１。由于缺乏疫苗，早期发现和 １材料与方法 控制传染源成为控制梅毒传播的重要措施［３１。梅毒临 床表现十分复杂。临床诊断主要依赖实验室血清学 １Ａ临床资料 收集２０１１年２月一２０１２年１Ｏ月期 间景德镇市妇幼保健院和疾病预防控制中心疑似梅 毒病例８２例，其中男３５例，女４７例，平均年龄２８ 岁。疑似梅毒患者均有不洁性接触史，外生殖器有典 作者单位：３３３０００江西省景德镇市妇幼保健院检验科（刘小 文）；江西省景德镇市疾病预防控制中心检验科（欧阳冬英） 型硬下疳、红丘疹或糜烂。对照标本来自非梅毒性 ＳＴＤ患者２８例（包括尖锐湿疣赘生物８例、淋病尿 ・４Ｊ４・ 中国现代医药杂志２０１３年４月第１５卷第４期ＭＭＪＣ，Ａｐｒ ２０１３，Ｖｏｌ １５，Ｎｏ．４ 道脓性分泌物６例、非淋菌性尿道炎分泌物ｌ４例）、 类风湿性关节炎（ＲＡ）１０例、系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） １．３．２ ＦＱ—ＰＣＲ扩增条件为９３％预变性２ｍｉｎ．９３℃ ４５ｓ、５５ｏＣ ６０ｓ共４０个循环，３３％保温。定量标准品稀 释、结果判定按试剂盒说明书进行。 患者１２例、肺结核患者９例、健康体检者２Ｏ例。 １．２试剂仪器ＦＱ—ＰＣＲ试剂盒购于中山大学达安 １．３．３血清学检测 所有待测者均采用ＴＲＵＳＴ、ＴＰ— 剂盒说明书进行。 １．４统计学分析 组间两两比较采用 检验，用 ＳＡ、ＴＰＰＡ ３种血清学方法检测抗体，严格按试 基因股份有限公司，梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验 ＥＬＩ（ＴＰＰＡ）试剂为日本富士瑞必欧株式会社产品，ＴＰ— ＥＬＩＳＡ试剂盒购于珠海丽珠试剂股份有限公司，甲 苯胺红不加热血清反应素试验（ＴＲＵＳＴ）试剂盒购于 上海荣盛生物制品研究所。ＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测 ＳＰＳＳ １３．０统计软件进行数据分析，Ｐ＜０．０５表示差异 有统计学意义。 ２结果 采用美国ＡＢＩ的７９００型高通量全自动荧光定量核 酸检测仪，酶标仪为美国ＢＩＯ—ＲＡＤ公司产品。 １．３方法 ｌ＿３．１标本采集与处理 疑似梅毒患者用无菌棉拭 ＳＴＤ患者取赘生物、尿道口或阴道Ｅ１分泌物，置于无 ４种方法检测不同标本的梅毒结果见表１。从表 检测分泌物的敏感性最高，高于ＴＰ—ＥＬＩＳＡ（Ｐ＜０．０５）、 子取硬下疳、红丘疹或糜烂面的分泌物，其他非梅毒 １可知，对疑似一期梅毒的检测结果显示，ＦＱ—ＰＣＲ 菌试管内，加入ｌｍｌ生理盐水振荡ｌｍｉｎ，转入１．５ｍｌ ＴＰＰＡ（Ｐ＜０．０５）和ＴＲＵＳＴ（Ｐ＜０．０１），也明显高于ＦＱ— 的离心管中，１３ ０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，弃上清，往沉淀 ＰＣＲ检测血清的敏感性（Ｐ＜０．０１）。对其他ＳＴＤ、ＲＡ、 物中加入５０ ｌ核酸提取液，振荡混匀５ｓ，１００￣Ｃ干浴 １０ｍｉｎ，４℃静置３０ｍｉｎ。１３ ０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，取上清 ２１ｘｌ为模板进行ＰＣＲ扩增：所有待测者同时取全血 ２ｍｌ离心分离血清．用于ＰＣＲ扩增和梅毒血清学检 测 ＳＬＥ、肺结核患者和健康人的检测结果显示，ＦＱ—ＰＣＲ 的特异性与ＴＰＰＡ相同，均为１００％；ＴＲＵＳＴ检ＮＲＡ、 ＳＬＥ和肺结核患者的假阳性较高。以上表明，ＦＱ— ＰＣＲ在一期梅毒的诊断中具有较高的敏感性和高度 特异性，但应以分泌物为待测标本。 表１ ４种方法检测梅毒结果（％） 注：与ｒＱ－ＰＣＲ（检测分泌物）方法相比，ａｐ＜０．０１；ｂＰ＜０．０５ 素出现晚于特异性抗体。患者经治疗后反应素滴度 ３讨论 降低或当抗体含量过高时出现前带现象，从而对一 期梅毒的敏感性较低【５］。本研究结果显示，ＴＲＵＳＴ 梅毒实验室诊断包括病原学和血清学方法。血 检测ＳＬＥ、ＲＡ、结核病患者的特异性较低，而对一期 清学方法是目前的主要方法．检测的螺旋体抗体有 梅毒的敏感性也明显低于其它方法。另一类为抗Ｔｐ 两类，一类为非特异性类脂质抗体（反应素），这类检 特异性抗体，这类检测方法主要有ＴＰＰＡ、荧光密螺 测方法主要有ＴＲＵＳＴ、快速血浆反应素试验（ＲＰＲ）、 旋体抗体吸收试验（ＦＴＡ—Ａｂｓ）、基于Ｔｐ重组抗原的 ＳＡ等，以Ｔｐ天然蛋白或重组抗原为诊断抗原， 性病研究实验室试验（ＶＤＲＬ），以非螺旋体（如牛心 ＥＬＩ６３，对二期梅 磷脂）为诊断抗原，试剂成本低，但反应素存在于许 特异性高．常作为梅毒诊断的“金标准”［多非梅毒患者（如ＳＬＥ、ＲＡ、结核病患者等）血清中， 毒、潜伏期梅毒的敏感性非常高，但由于Ｔｐ感染后 因而生物学假阳性较高：此外，在梅毒感染早期反应 ２ ３周才开始出现特异性ＩｇＭ类抗体，因而此类方 中国现代医药杂志２０１３年４月第１５卷第４期ＭＭＪＣ，Ａｐｒ ２０１３，Ｖｏｌ １５，Ｎｏ．４ ・４５・ 法对一期梅毒的敏感性较低阎。本结果显示，ＴＰＰＡ与 Ｃｈｉｎａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２０１０，３６２（１８）：１６５８—１６６１ Ｘｉａｏ Ｙ，Ｓｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｙａｌｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｏｆ ＨＩＶ ａｎｄ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｍｅｎ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｓｅｘ ｗｉｔｈ ｍｅｎ ｉｎ ｓｅｖｅｎ ＴＰ－ＥＬＩＳＡ均显示出良好的特异性，但对一期梅毒 的敏感性较检测分泌物的ＦＱ—ＰＣＲ低。 一ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｗｉｔｈ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｌｙ ｌｏｗ ＨＩＶ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ．Ｊ Ａｃｑｕｉｒ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ Ｓｙｎｄｒ，２０１０，５３，１：６６—７３ Ｌａｆｏｎｄ Ｒ Ｅ，Ｌｕｋｅａ￣Ｓ Ａ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｃｌｉｎ Ｍｉ— ｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ，２０ｏ６，１９：２９—４９ 期梅毒典型的临床表现是外生殖器局部出现 无痛性硬下疳，其溃疡面含Ｔｐ。由于Ｔｐ至今还不能 ３ 人工培养，病原学检测Ｔｐ常规方法是暗视野显微镜 （ＤＦＭ）和免疫荧光染色观察，ＤＦＭ在螺旋体数量较 ４ 少时敏感性低，而且Ｔｐ形态易与其它螺旋体混淆， 受主观因素影响，观察时需要经验丰富的技师。ＦＱ— Ｖａｎ Ｖｏｏｒｈｉｓ ＷＣ，Ｂａｒｒｅｔｔ ＬＫ，Ｌｕｋｅｈａｒｔ ＳＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ：ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｐ０４５３，Ｔｐ９２，ａｎｄ Ｇｐｄ ｐｒｏ— ｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｉｆｅｃｔｉｎｏｎ ｂｙ Ｔｒｅｐｏｎｅ— ＰＣＲ是近年来ＡＢＩ公司推出的实时荧光定量ＰＣＲ 技术．弥补了常规ＰＣＲ易污染导致假阳性和不可定 量的缺陷，是检测Ｔｐ敏感、特异、客观、可自动化、能 定量的方法．尤其适用于抗体尚未产生前的一期梅 毒 ，此期敏感性高于血清学方法，本研究结果也显 示ＦＱ—ＰＣＲ检测疑似梅毒患者的分泌物时较血清学 方法敏感。ＦＱ—ＰＣＲ特异性很高，与ＴＰＰＡ、ＴＰ—ＥＬＩＳＡ 等确认血清学试验相当［８１，本研究结果与此一致。但 在ＰＣＲ的运用中，样本的来源尚有争议。Ｗｉｃｈｅｌ￣等 以ＴＤ感染兔为动物模型评价ＰＣＲ检测各种样本 灵敏度。认为全血、新鲜或冷冻组织样本进行ＰＣＲ 均有较理想结果，而血清却不适合。Ｂｕｒｓｔａｉｎｔ ０１等则 认为，损伤部位的分泌物、组织、脑脊液、羊水和血清 标本均可用于ＰＣＲ检测Ｔｐ。本研究结果显示，以局 部分泌物为标本的ＰＣＲ扩增阳性率明显高于血清 为标本的阳性率，与大多数研究一致【“ ３］。 综上所述，ＦＱ—ＰＣＲ方法具有敏感、特异、可定 量、自动化的优点，在一期梅毒的诊断中显示出良好 的优越性。值得临床推广，可作为血清学方法诊断梅 毒的有效补充。 参考 文 献 １ Ｔｕｃｋｅｒ ＪＤ，Ｃｈｅｎ ＸＳ，Ｐｅｅｌｉｎｇ ＲＷ．Ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｎｄ ｓｏｃｉａｌ ｕｐｈｅａｖａｌ ｉｎ ｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４１（８）：３６６８—３６７４ Ｃａｓｔｒｏ Ｒ，Ｐｒｉｅｔｏ ＥＳ，ｄａ Ｌｕｚ Ｍａｒｔｉｎｓ Ｐｅｒｅｉｒａ Ｆ．Ｎｏｎｔｒｅｐｏｎｅｍａｌ ｔｅｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｓｐｙｈｉｌｉｓ：ａｎ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｖｅｎｅｒｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＶＤＲＬ）ａｎｄ ｔｈｅ Ｒａｐｉｄ Ｐｌａｓｍａ Ｒｅａｇｉｎ（ＲＰＲ）ｔｅｓｔｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ，２００８，２２（４）：２５７—２６１ Ｃａｓｔｒｏ Ｒ，Ｐｒｉｅｔｏ ＥＳ，Ａｇｎａｓ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｐａｒｔｉｃｌｅ ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ（ＴＰ．ＰＡ）ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏ— ｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ，２００６，２０（６）：２３３－２３８ ７ Ｈｅｙｍａｎｓ Ｒ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｌｍ ＪＪ，ｄｅ Ｖｒｉｅｓ ＨＪ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｒｅａｌ—ｔｉｎｌｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２０１０，４８（２）：４９７—５０２ 。 Ｋｏｅｋ ＡＧ，Ｂｍｉｓｔｅｎ ＳＭ，Ｄｉｅｒｄｏｒｐ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｐｙｈｉｌｉｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｆｏｒ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌ— ｌｉｄｕｍ．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ，２０ｏ６，１２（１２）：１２３３—１２３６ ９ Ｗｉｃｈｅｒ Ｋ，Ｎｏｏｒｄｈｏｅｋ ＧＴ，Ａｂｂｒｕｓｅａｔｏ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅ— ｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｂｙ ＤＮＡ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９２，３０（２）：４９７—５００ Ｂｕｒｓｔａｉｎ ＪＭ，Ｇｒｉｍｐｒｅｌ Ｅ，Ｌｕｋｅｈａｒｔ ＳＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９１，２９（１）：６２－６９ １１ 刘冰，陈华根，杨道琼．ＰＣＲ技术在诊断一期梅毒中的应用．检验 医学与临床，２００４，１（２）：４９—５２ １２ 张永乐，章松平，马兰，等．检测早期梅毒螺旋体感染的４种方 法比较．中国皮肤性病学杂志，２００７，２２（２）：ｌ１８一ｌ１９ １３ Ｇａｙｅｔ－Ａｇｅｒｏｎ Ａ，Ｎｉｎｅｔ Ｂ，Ｔｏｕｔｏｕｓ－ＴｒｅＵｕ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｔｅｓｔ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｅ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｆｒｏｍ ｄｉｖｅｒｓｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｓｅｘ Ｔｒａｎｓｍ Ｉｆｎｅｃｔ，２０ｏ９，８５（４）：２６４－２６９ （收稿：２０１３—０２—２７）