维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年２月第５卷第６期 ・论著・ 免疫性卵巢早衰小鼠生殖能力的研究 朱玲，罗颂平，许藤绵 Ｌ广州中医药大学第一临床医学院妇科，广东广州５１０４０５） 【摘要】目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（ＰＯＦ）小鼠动情周期、卵泡刺激素（ＦＳＨ）、雌二醇（Ｅ：）、受孕率的 影响。方法：以小鼠透明带３为抗原，皮下多点注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ雌 Ｉ￣＇／ｂ鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、 中、高不同剂量进行治疗，以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照，观察动情周期、受孕率，ＥＬＩＳＡ法检测外周血清ＦＳＨ、Ｅ２ 水平。结果：模型组小鼠动情周期紊乱，ＦＳＨ增高，Ｅ：降低，受孕率低下 、左归丸各剂量组动情周期时间延长，但仍有 规律性变化。ＦＳＨ升高及Ｅ：降低均不明显，受孕率也低下。结论：模型组卵巢功能损伤、破坏。左归丸能改善、保护 卵巢功能，但对受孕率改善不明显。 【关键词】卵巢早衰；左归丸；动情周期；ＦＳＨ；Ｅ。；受孕率 ｆ中图分类号】Ｒ７１１ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３－７２１０（２００８）０２（ｃ）一０１３—０３ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅｍｉｃｅ ．ＺＨＵＬｉｎｇ，ＬＵＯ Ｓｏｎｇ－ｐｉｎｇ，ＸＵＬｉ——ｍｉａｎ （ＤｅＤａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｉ ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １ ０４０５，Ｃｈｉｎａ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｐｒｏｂｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｚｕｏｇｕｉ Ｐｉｌｌ（ＺＧＰ），ａ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｒｅｃｉｐｅ ｆｏｒ ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ Ｓｈｅｎ，ｏｎ ｅｓｔｒｏｕｓ ｃｖｃｌｅ．ＦＳＨ、Ｅ．ａｎｄ ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｍｉｃｅ．ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｅ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ（ＰＯＦ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＢＡＬＢ／ｃ ｆｅｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ＰＯＦ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｉｔｅｓ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｚｏｎａ ｐｅｌｌｕｃｉｄａ ３ ｏｆ ｍｉｃｅ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅ ＺＧＰ ｏｆ ｌｏｗ ｍｉｄｄｌｅ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｏｎｅ．ｗｉｔｈ ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ ａｎｄ ｄｉａｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ ａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｅｓ・ ｔｒｏｕｓ ｃｖｃｌｅ ｏｆ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ．Ｄｅｔｅｃｔｅｄ ＦＳＨ ａｎｄ Ｅ２ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｅｒｕｍ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｅｓｔｒｏｕｓ ｃｖｃｌｅ ｏｆ ＰＯＦ ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＦＳＨ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄ Ｅ２ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｅｃｏｍｅ ｌｏｗ Ｔｈｅ ｐｅ— ｒｉｏｄ ｏｆ ｅｓｔｒｏｕｓ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅ ＺＧＰ．ｂｕｔ ｓｔｉｌｌ ｋｅｐｔ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｐｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＦＳＨ ａｎｄ Ｅ，ｉｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ａｌｓｏ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｈｕｒｔ ａｎｄ ｄｅｓｔｒｏｙｅｄ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ＰＯＦ ｍｉｃｅ．ＺＧＰ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ；Ｚｕｏｇｕｉ Ｐｉｌｌ；Ｅｓｔｒｏｕｓ ｃｙｃｌｅ；ＦＳＨ；Ｅ２：Ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ 卵巢早衰（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ ＰＯＦ）是指女性在４Ｏ 州中肽生化有限公司生产，批号：Ｐ０００７４。 岁前出现卵巢功能衰退，主要表现为月经稀发或持续闭经 １．１Ｉ２．２弗氏完全佐剂美同Ｓｉｇｍａ公司产品，批号：０７５Ｋ８９１５： 常伴烘热、多汗、失眠等躯体症状，及出现焦虑、抑郁、敏感、 弗氏不完全佐剂：美国Ｓｉｇｍａ公司产品．批号：１０５Ｋ８９０７。 敌对、压抑，阴道干涩，性交痛、性生活不满意等不适ｃＩＩ 骨质 １．１．２．３醋酸泼尼松片中山市三才医药集团有限公司生产， 疏松、心血管疾病等患者发生可较自然绝经者提前１０年，妊 批号：２００５０３１１６。 娠主要依赖卵子捐赠ｊ２ｊ，是一类严重影响妇女身心健康的疾 １．１．２．４己烯雌酚山东鲁抗辰欣药业有限公司生产．批号： 病 左归丸具有补肾精、养精ｍ、化瘀血之功，临床治疗卵巢 ０５１１０３２０１。 早衰有一定的疗效 。 １．１．２．５左归丸南熟地２４ ｇ、山药１２ ｇ、枸杞子１２ ｇ、山茱萸 １材料与方法 １２ ｇ、川牛膝１２ ｇ、菟丝子９ ｇ、鹿角胶１２ 龟板胶１２ ｇ组 １．１材料 成，龟板胶由南方医院中药房提供，其余中药南广州巾医药 １．１．１动物ＳＰＦ级ＢＡＢＬ／ｃ雌性小鼠１１０只．捧性小鼠２０只， 大学第一附属医院中药房提供。 体重１８～２２ ｇ，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证 １．１．２．６其他ＦＳＨ酶联免疫试剂盒（ｐｇ／ｍ１）：批号：３３３２３０３ＥＩＡ。 号：粤监证字２００６Ａ０１９，动物实验环境监测合格证号：粤监 酶联免疫试剂盒（ｐｇ／ｍ１）：批号：３１１３０３ＥＩＡ。以上试剂南美 证字２００６Ｃ０８２。雌、雄按６：１的比例片ｊ有分隔的饲养笼饲养， 同ＵＮ１０ＮＨＯＮＥＳＴ公司生产、 以诱导小鼠的正常发情周期。每天阴道脱落细胞涂片，观察 １．１＿３主要仪器酶标仪：德国ＢＩＯ—ＲＡＤ生产，Ｍｏｄｅｌ：５５０。 动物的发情周期。选择有规律动情周期的小鼠进行实验（以 １．２方法 ２个动情周期计算）。 １．２＿１ Ｐ０Ｆ模型制备称取２ｍｇＺＰ３透明带多肽粉末，加入２ｍｌ １．１．２药物与试剂 三蒸水配成溶液・，取１ ｍｌ溶液稀释至６ ｍｌ溶液，与弗氏完全 １．１＿２．１小鼠透明带多肽溶液小鼠透明带３（ＺＰ３）的第３３０～ 佐剂按１：１比例配制成免疫试剂．与弗氏不完全佐剂按１：１比 ３４２个氨基酸序列（ＮＳＳＳＳＱＦＱＩＨＧＰＲ），其分析纯度＞９５％，杭 例配制成免疫强化试剂。按文献方法造模州，每鼠取０．１５ ｍｌ 作者简介：朱玲，医学博士．广州中医药大学第一临床医学院 免疫试剂皮下多点注射双后脚掌及腹腔，１４ ｄ后以免疫强化 基金项目：国家自然科学基金青年基金（Ｎｏ．３０４００６０７ 试剂０．１５ ｍｌ皮下多点注射小鼠双后脚掌及腹腔加强免疫。 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ巾国医药弓报１ ３ 维普资讯 http://www.cqvip.com ・论著・ 为无规则动情周期的次数。 ２００８年２月第５卷第６期 １．２．２分组随机分为空白对照组、模型组、佐剂组、泼尼松 组、己烯雌酚组、左归丸低剂量组、左归丸中剂量组、左归丸 高剂量组。 １．２．５ ＦＳＨ、Ｅ２检测于给药４周后眼眶采血，离心，取血清采 用ＥＬＡＳＡ法检测，按试剂盒说明书操作。 ｌ－２－３给药除空白对照组及佐剂组外，模型组及其余组小鼠 于双后脚掌及腹腔皮下多点注射免疫试剂０．１５ ｍ１．空白对 １．２．６妊娠率检测于第二次免疫后１周开始灌胃给药（同 １．２．３），连续给药４周。将雌性小鼠与雄性小鼠以２：１比例合 照组注射生理盐水０．１５ ｍｌ，佐剂组注射弗氏完全佐剂０．１５ ｍｌ； １４ ｄ后各组动物于双后脚掌及腹腔皮下多点注射新鲜配制 的免疫强化试剂，空白对照组再次注射生理盐水０．１５ ｍ１．佐 剂组注射弗氏不完全佐剂０．１５ ｍｌ；第二次免疫后第６天各 笼饲养，每天观察动物的阴道栓，把有阴道栓的雌性小鼠取 出，没有的继续雌雄合笼饲养，配种维持时间为４ ｄ。３周后 处死动物，解剖子宫，观察动物的妊娠率。 １．３统计学方法 药物开始组灌胃给药。其中泼尼松按２０ｍｇ／（Ｊ￣・ｄ１，根据小鼠与 人的体表面积进行换算，用冷开水溶解药片，制成溶液，调整浓 度，使每毫升溶液含泼尼松０．１７ｍｇ。己烯雌酚按１ ｍｇ／（人・ｄ），根 据小鼠与人的体表面积进行换算，用冷开水溶解药片 制成 溶液，调整浓度，使每毫升溶液含己烯雌酚０．００９ ｍｇ。中药组 除鹿角胶、龟板胶外，其余药物均水煎后去渣．纳鹿角胶及龟 板胶烊化，浓缩，调配浓度，使低剂量左归丸溶液每毫升含生 药０．５ ｇ；中剂量左归丸溶液每毫升含生药１ ｇ；高剂量左归 丸溶液每毫升含生药２ ｇ。每只小鼠灌胃量均为０．３ ｍｌ，空白对 采用ＳＰＳＳ １０．０统计软件，计数资料采用Ｘ：检验，计量 资料采用均数±标准差（￣－＋－ｓ）表示，进行ｔ检验。 ２结果 ２．１免疫性ＰｏＦ小鼠的动情周期变化 免疫后，模型组小鼠逐渐表现为动情周期紊乱，仅有动 情后期和动情问期，或仅有动情前期、动情期，或表现为持续 的动情问期，阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量上 皮细胞。己烯雌酚组也表现动情周期紊乱，主要为持续的动 情期，阴道细胞涂片主要表现大量角化细胞。中药各组也有 动情周期紊乱的表现，但主要为动情周期时间延长，仍有动 照组、模型组、佐剂组灌胃相同量蒸馏水。连续灌胃４周，每 周休息１ ｄ。 １．２．４动情周期观察从小鼠第一次免疫起，各组动物每天早 情前期、动情期、动情后期、动情问期的规律性变化。 按免疫后１～１４ ｄ、１５—３５ ｄ、３６～５５ ｄ三个不同的时段及 上８：００进行阴道脱落细胞涂片观察动情周期的变化。小鼠 动情周期为４～６ ｄ，即每４—６天内出现动情前期、动情期、动 情后期、动情问期的周期性变化，则记为一次规则的动情周 期：如杂乱无章，或持续某一个时期无变化，则记为无规则动 情周期，以６ ｄ为界，如６ ｄ以上，则以出现的天数除以６，折 １～５５ ｄ整个时段统计有规则的动情周期及无规则的动情周 期（表１），对结果进行Ｘ 检验，其中１～１４ ｄ：Ｘ ＝２０．７１５，Ｐ＜ ０．０５；１５—３５ ｄ：Ｘ ＝１４．１９５，Ｐ＜０．０５；３６－５５ ｄ：Ｘ ＝４７．８４５，Ｐ＜ ０．００１；ｌ～５５ ｄ：￣２＝－５２４５３，Ｐ＜Ｏ．００１，说明各组问有显著性差异。 ．表１免疫性ＰＯＦ小鼠动情周期变化表 ２．２免疫性ＰＯＦ小鼠ＦＳＨ和Ｅ２的变化及左归丸的影响 表２免疫性ＰＯＦ小鼠ＦＳＨ和Ｅ２的变化及左归丸的影响（ Ｊ 模型组与空白对照组、佐剂组相比，ＦＳＨ明显增高，Ｅ 明 显降低，均有显著性差异。左归丸各剂量组ＦＳＨ、Ｅ：与空白对 照组、佐剂组相比差异无统计学意义，与模型组相比，ＦＳＨ增 高及Ｅ 降低均不明显，差异有显著性；各剂量组间无显著性 差异。与泼尼松组相比，ＦＳＨ增高也不明显，差异有显著性。 泼尼松组与空白对照组相比，ＦＳＨ明显增高，差异有显著性； 与模型组相比，Ｅ 水平也明显增高，差异有显著性。己烯雌酚 组与模型组相比，ＦＳＨ增高及Ｅ 降低均不明显，差异有显著 性。见表２。 ２．３免疫性ＰＯ１ｚ小鼠的受孕能力及左归丸的影响 与空白对照组相比： Ｐ＜Ｏ．０５，术木Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；与模型组相比： Ｐ＜Ｏ．０５，” Ｐ＜Ｏ．Ｏ１． ”Ｐ＜Ｏ．００１；与泼尼松组相比：’Ｐ＜Ｏ．０５，”Ｐ＜Ｏ．Ｏ１，” ｌ（Ｏ．Ｏ１ 除空白对照组外，受试各组胎仔数均明显减少，与空白 对照组相比差异显著，尤以模型组胎仔数减少最明显，差异 最显著（Ｐ＜Ｏ．００１），左归丸各剂量组胎仔数与模型组相比有 １ ４巾国医药导囊ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年２月第５卷第６期 ・论著・ 所增加，且存在一定的量效关系，但均与模型组相比无显著 性差异，各剂量组间也无显著性差异。泼尼松组胎仔数也减 少。但幅度较小，佐剂组、己烯雌酚组胎仔数均有明显减少， 左归丸各剂量组也有动情周期紊乱的表现，但主要为动 情周期时间延长。仍有较规律的变化。ＦＳＨ、Ｅ 与空白对照 组、佐剂组相比差异不明显，与模型组相比，ＦＳＨ增高及Ｅ 各受试组间并无显著性差异。见表３。 表３免疫性ＰＯＦ小鼠的受孕能力及左归丸的影响（元 ） 与空白对照组相比： Ｐ＜０．０５，｛ Ｐ＜０．０１，｛｛ Ｐ＜０．００１ ３讨论 卵巢早衰内分泌特征主要表现为高ＦＳＨ、低Ｅ ，其病因 目前尚不清楚，尽管遗传学方面的因素及盆腔化疗、放疗、手 术、吸烟等与ＰＯＦ有关，但仍有１／３～１／２的病例是特发的。此 病部分患者可自发缓解，甚至受孕。激素替代治疗（ＨＲＴ）是 主要的治疗方法。ＰＯＦ患者卵巢活检表明卵巢局部出现活化 Ｔ淋巴细胞浸润．卵泡上皮细胞表达ＨＬＡ—ＤＲ和ＣＤ４０ｒ￣。自 身免疫性卵巢疾病（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｏｖａｒｉａｎ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＯＤ）被认为 是导致人类ＰＯＦ产生的原因之一，但ＰＯＦ的免疫学基础至 今还知之甚少１６１。有研究发现，ＰＯＦ具有肾虚血亏血瘀的病机 特点口。 左归丸出自明代温补派名家张景岳的《景岳全书・新方 八阵》，主要有滋肾阴、养精血的作用，兼具活血之功。张氏在 《素问》“形不足者，温之以气；精不足者，补之以味”的基础 上，受仲景肾气丸制方思想的启发，提出“善补阴者，必于阳 中求阴，则阴得阳升而泉源不竭”的观点，创制“阳中求阴”的 代表方左归丸体现其该学术观点，完善了补肾调阴阳平衡的 理论。左归丸方中以熟地为君药，滋肾阴养精血：臣以山茱萸 养肝滋肾、山药补脾益阴、枸杞子补肾益精，并在此草木并补 肾肝脾三阴的基础上配伍龟、鹿二胶血肉有情之品，以填精 补髓，滋生真阴，共助熟地滋肾阴养精血：佐以菟丝子温阳益 阴，合鹿角胶，“阳中求阴”，使肾中阴精的产生由阳气作为化 生动力而源源不绝，佐川Ｉ牛膝通利血脉，活血化瘀，补肾强 腰。全方的配伍注重寓调节肾的阴阳平衡于补肾之中．以平 为期，虽为补阴血之剂，然补阴之中寓有补阳之用，共达补肾 精、养精血、化瘀血之功。临床上用此治疗围绝经期综合征， 可消除烘热汗出、烦燥易怒、口干咽燥等症状，能增加阴道分 泌物，改善外阴、阴道干涩症状，并有报道对雌激素水平不足 的闭经也有较好的疗效阎。 研究中发现模型组小鼠表现为喜欢扎堆，毛发松乱．易 激惹，并出现动情周期紊乱；与空白对照组、佐剂组相比， ＦＳＨ明显增高，Ｅ 明显降低，均有显著性差异。与空白对照组 相比，胎仔数均明显减少，差异极显著（Ｐ＜０．００１），表明模型 组小鼠卵巢受到抗明带抗体的损伤．卵巢功能破坏。 降低均不明显，差异有显著性；各剂量组间无显著性差异。与 泼尼松组相比．ＦＳＨ增高也不明显，差异有显著性。左归丸各 剂量组胎仔数与模型组相比有所增加．且存在一定的量效关 系．但均与模型组相比无显著性差异．各剂量组问也无显著 性差异。表明左归丸具有调节内分泌功能，减缓抗明带抗体 所致的小鼠卵巢的损伤．对卵巢功能有一定的保护作用，但对 小鼠的受孕率改善作用不显著，也许与用药时间较短有关。 佐剂组与空白对照组相比ＦＳＨ、Ｅ 变化不明显（Ｐ＞０．０５）， 但胎仔数也明显减少，差异有显著性。说明佐剂对卵巢功能 也有一定的损伤。 泼尼松组与空白对照组相比。ＦＳＨ明显增高，差异显著； 与模型组相比，Ｅ 水平也明显增高，差异有显著性；与空白对 照组相比胎仔数也减少。差异有显著性，幅度较模型组小，但 无显著性差异。随机双盲法的病例对照研究表明运用Ｇｎ． ＲＨａ＋促性腺激素治疗ＰＯＦ时，联合皮质激素使用有益于恢 复卵巢的功能 。泼尼松对ＦＳＨ改善不明显，对Ｅ 水平有一 定提高，是否泼尼松组卵巢早衰处于较早期阶段，过高的 ＦＳＨ导致卵巢Ｅ 水平增加，有待进一步研究。 己烯雌酚组与模型组相比，ＦＳＨ增高及Ｅ 降低均不明 显，差异有显著性。与空白对照组相比胎仔数也减少，差异有 显著性。表明补充雌激素可通过下丘脑一垂体一卵巢轴的负反 馈机制抑制增高的ＦＳＨ，改善生殖内分泌，但对抗明带抗体 所导致的小鼠卵巢损伤改善不明显．受孕率低。 综上所述，模型组小鼠动情周期紊乱，ＦＳＨ增高，Ｅ 降 低，受孕率低下，卵巢功能损伤、破坏。左归丸能改善ＦＳＨ、Ｅ 水平，表现为较规律的动情周期，但仍受孕率低下。其机制有 待进一步研究。 【参考文献】 【１］Ｖａｎ ｄｅｒ Ｓｔｅｇｅ ＪＧ，Ｇｒｏｅｎ Ｈ，ｖａｎ Ｚａｄｅｌｈｏｆｆ ＳＪ，ｅｔ ．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ ｇｅｎｅｒａｌ ａｎｄ ｓｅｘｕａｌ ｗｅｌｌ—ｂｅｉｎｇ ｉｎ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉｎａ ｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ，２００７，１３：４４—４５． 【２］Ｓｉｎｈａ Ｐ＇Ｋｕｒｕｂａ Ｎ．Ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉｎａ ｆｉａｌｕｒｅ［］Ｊ．Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎａｅｃｏｌ，２００７， ２７（１）：１６—１９． 【３］Ｃｈａｏ ＳＬ，Ｈｕａｎｇ ＬＷ，Ｙｅｎ ＨＲ．Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｉｎ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｒｕｅ ａｆｔｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ［］Ｊ．Ｃｈａｎｇ Ｇｕｎｇ Ｍｅｄ Ｊ，２００３， ２６（６）：４９－－４５２． 【４］付莉，赵恰璇，李守柔．卵巢早衰实验动物模型的建立【Ｊ］．生殖医学杂 志．２００６．１５（３）：１７９—１８３． 【５］Ｂａｔｓ ＡＳ，Ｂａｒｂａｒｉｎｏ ＰＭ，Ｂｅｎｅ ＭＣ，ｅｔ ．Ｌｏｃａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅ— ｌｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｃａｓｅ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｏｏｐｈｏｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００７， ８７，７５７—７６３． ｆ６］朱玲，罗颂平，欧汝强．卵巢早衰的免疫学研究进展【Ｊ］．生殖医学杂志， ２００５，１４（２）：１２０—１２４． 【７］朱玲，罗颂平．卵巢早衰的病因病机及其证治Ⅲ．中医药学刊．２００３，２１ （１）：１４３—１４４． 【８］朱玲，陈彬彬，黄泉智，等．左归丸临床与实验研究进展Ⅲ．国医论坛， ２００３，１８（２）：５ １－５３． 【９］Ｂａｄａｗｙ Ａ，Ｇｏｄａ Ｈ，Ｒａｓ￣ｂ Ａ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｖｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｒｅ－ ｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆｉａｌｕｒｅ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｄｏｕｂｌｅ—ｂｌｉｎｄ ｔｒｉａｌ【Ｊ］．Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｍｅｄ 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