大麻研究中的分子标记应用

文章编号：１６７３－７６３６（２００７）０４－０１８９－０３

大麻研究中的分子标记应用

曾民１，郭鸿彦２，胡学礼２，许燕萍２，杨明２＊

（１．云南农业大学农学与生物技术学院，昆明６１５１０１；２．云南农业科学院经济作物研究所，昆明

６１５１００）

摘要：本文综述了以ＰＣＲ技术为基础的ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、ＩＳＳＲ、ＳＴＲ、ＩＧＳ等ＤＮＡ分子标记技术在大麻遗传变异、品种鉴定与来源推断等方面的应用进展，并提出了一些值得注意的问题以及今后可能的发展方向。

关键词：大麻；分子标记中图分类号：Ｓ５６３．３

文献标志码：Ｂ

大麻是一种可在世界范围内广泛种植的经济作物，具有多种用途，可综合开发利用，现在得到了越来越广泛的研究及利用。由于大麻植株中存在使人致幻成瘾成分，在世界上许多国家大麻的种（ＴＨＣ）的含量的高低分为工业大植和生产被列为管制范围。大麻根据其致幻成瘾成分四氢大麻酚

麻和毒品大麻。毒品大麻、海洛因和可卡因曾被联合国禁毒公约列为三大毒品。工业大麻和毒品大麻在形态学上很难辨别。而且大麻是雌雄异株异花授粉作物，因而在品种间易混杂和变异。因此正确而快速的辨别大麻品种对于工业大麻产业的良好发展和毒品大麻的稽查工作就显得十分重要了。传统的大麻检测方法包括：化学显色、薄层色谱（ＴＬＣ）、气谱质谱联用仪（ＧＣ－ＭＳ）、高压液相色谱（ＨＰＬＣ）、细胞显微法等。然而，这些方法对于少量和微量的大麻样品是很难检测和辨别的。

分子标记是传统的形态学和细胞学标记之后发展起来的一种分子水平上的遗传标记，包括蛋白质标记和基于ＤＮＡ序列多态性及重复位点多态性的ＤＮＡ分子标记。现已广泛应用于生物基因组研究，如鉴定生物指纹，探讨基因组起源和生物进化，定位优异基因，指导基因克隆，构建遗传图谱，评价生物多样性，检测群体内遗传变异等方面。近年来，分子标记技术得到了迅速发展，在传统植物研究中也发挥重要作用。大麻是世界上最古老的栽培作物之一，有着上千年的历史。我国是世界上大麻种植历史最长、种质资源最丰富的国家之一，但还没有相应完整的大麻品种鉴定和区分体系。随着分子标记技术的飞速发展，分子标记得以广泛应用于包括大麻多态性分析、品种鉴别、来源推断、基因克隆与定位等方面。本文将分别概述几种分子标记在大麻中的应用现状及前景。

１

１．１

分子标记技术在大麻研究中的应用现状

通过ＤＮＡ序列鉴定大麻及加工物

１９９８年ＡｄｒｉａｎＬｉｎａｃｒｅ发明了一种全新的通过大麻的ＤＮＡ序列来从其它的植物中检测大麻样品的方法，他根据物种间ｔＲＮＡ序列的相对保守性，利用大麻叶绿体基因组中ｔｒｎＬ基因３＇端的外显子和ｔｒｎＦ基因之间具有一段特异的内含子序列设计了特异的引物，通过ＰＣＲ扩增能产生一段特异的ＤＮＡ带，而在其它的植物中这对特异的引物却扩增不出这段特异的ＤＮＡ带，以此为据可用

这一发现弥补了常规方法对大麻检测的不足（即无法检测微量或少量于区别大麻和其它的植物［１４］。

样品），同时也为分子技术在大麻物证检测上应用提供了证据。

１．２ＲＡＰＤ标记在大麻中的应用进展

ＲＡＰＤ是美国的Ｗｉｌｌｉａｍｓ［１］和Ｗｅｌｓｈ［２］两个研究小组于１９９０年同时发展起来的技术，它以ＰＣＲ

收稿日期：２００７－０４－２４

基金项目：国家公益性行业科研专项经费项目（ｎｙｈｙｚｘ０７－０１８）；国家科持发展支撑计划项目（２００６ＢＡＫ０９０３）作者简介：曾民（１９８０－），男，研究生，研究方向为分子生物学。

＊通讯作者：杨明（１９６６－），男，副研究员。从事大麻遗传育种研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｍｉｎｇ６６＠ｔｏｍ．ｃｏｍ１９０中国麻业科学第２９卷

反应为基础，采用１０ｂｐ的寡核苷酸为引物进行模板ＤＮＡ多态性的随机扩增和检测。由于ＲＡＰＤ技术不需要事先获得模板ＤＮＡ序列信息，且所需ＤＮＡ样品量小、设备及技术简单、周期短、扩增没有特异性、合成一套引物可用于不同物种基因组的分析，因而受到研究者的喜爱。由于对大麻的

ＤＮＡ序列的认识不够，早期对大麻的分子水平研究多利用ＲＡＰＤ分子标记技术。虽然ＲＡＰＤ技术

存在重复性差和特异性差等方面的问题，但对大麻进行多态性分析及亲缘关系鉴定来说还是不错的方法，并随着分子标记的发展也不断的完善。１９９６年，Ｖｉｄｙａｊａｇａｄｉｓｈ对来自澳大利亚５１个大麻品种（１０个堪培拉，８个新南威尔士，２５个昆士兰州，８个巴布亚岛）和２个品种的麻蛇草进行

ＲＡＰＤ多态性分析，发现大麻品种和蛇麻草品种有很大不同，并且５１个大麻品种也被分为巴布亚岛组群、堪培拉组群和第３个组群。从而暗示了不同地区的大麻具有不同的遗传背景，对分子生物

学在大麻品种来源分析上提供了可靠的证据［３］。在２００１年，ＳｉｌｖｉａＦｏｒａｐａｎｉ［４］也证明了这一结论。宋书娟（２００１年）利用ＲＡＰＤ标记在大麻中发现了一条８２０ｂｐ的特异带，通过将ＲＡＰＤ分子标记转化为

ＳＣＡＲ分子标记，证实这条带和大麻的性别有关，被认为是用作鉴别大麻性别的特异性分子遗传标

记［５］。２００１年，陈其军利用ＲＡＰＤ技术在扩增产物中得到一条约２．５ｋｂ雄性多态性片段，也证实为大麻性别相关的连锁的分子标记。对该片段进行了克隆和序列分析，并根据序列分析结果将上述

ＲＡＰＤ分子标记转化为重复性和特异性更好的ＳＣＡＲ分子标记［６］。２００２年，苏友波利用ＲＡＰＤ分析

技术对野生型大麻和栽培大麻的基因组进行分析，从２８０个引物中筛选出４２个扩增效果好的引物，为以后ＲＡＰＤ技术在大麻中的研究奠定了基础［７］。

１．３ＩＳＳＲ在大麻上的应用

ＩＳＳＲ分子标记技术是１９９４年由加拿大蒙特利尔大学Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ等［８］发展起来的一种基于微卫星（ＳＳＲ）序列的分子标记技术。与ＳＳＲ相比，用于ＩＳＳＲ的引物不需要预先的ＤＮＡ测序，而是用半随机引物进行扩增，可获得丰富的多态性。２００２年，Ｍａｒｅｓｈｉｇｅ利用ＩＳＳＲ技术对用高压液相色谱（ＨＬＣＰ）无法区别的大麻材料做序列分析。通过ＰＣＲ扩增所产生多态性带型结果的分析说明，通过ＩＳＳＲ技术不但能得到利用ＨＬＰＣ技术所得到的结果，还能做到ＨＬＰＣ技术无法完成的工作（即ＨＬＰＣ技术能区别出ＴＨＣ含量差别的大麻样品，但无法区别出其ＴＨＣ含量相似，其ＣＢＤ相差较大的大麻样品）。证实了ＩＳＳＲ分子标记技术可用于多个大麻品种间遗传距离的分析和亲缘关系的鉴定，同时也为ＩＳＳＲ分子标记技术在大麻毒品物证检测上的应用提供了有力的证据［９］。１．４ＡＦＬＰ在大麻上的应用

ＡＦＬＰ是１９９３年由荷兰Ｋｅｙｇｅｎｅ公司Ｚａｂｅａｕ［１０］等发明的一种ＤＮＡ分子标记技术。主要过程是性酶切片段的选择性扩增，ＡＦＬＰ结合了ＲＦＬＰ的稳定性和ＰＣＲ技术高效性的特点，不需要进行杂交。是一种理想的分子标记。ＡＦＬＰ多态性高，可检测５０－１００ｂｐ的扩增片段。ＳｈａｎｎｏｎＬ．利用ＡＦＬＰ分子标记检测三个纤维大麻品种和一个毒品大麻品种键的遗传差异。通过十对引物共扩增出１２０６条带，并且其中８８％具有多态性。１８条特异带可用来区别纤维大麻和毒品大麻。通过实验得出了３点结论：（１）建立了栽培品种的共同特异序列，并可用来与毒品大麻相区别。（２）能够通过

（３）能从合法栽培的大麻中鉴定出潜在的、ＡＦＬＰ分子标记来判断缴获的大麻品种的来源及产地。

非法种植的大麻［１１］。这种遗传标记方法已经在加拿大、欧洲被用于法政检测。

１．５在大麻中应用的其它分子标记

（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ）是人类的短串联重复序列，由２－６个碱基对作为核心单位串联重复形ＳＴＲ

成的一类ＤＮＡ序列，核心重复单位数目的变化构成了ＳＴＲ基因座的遗传多态性。ＳＴＲ的遗传信息量大，具有高度的多态性，是一种理想的ＤＮＡ遗传标记，广泛应用于人类学、遗传学和法医学。Ｈｓｉｎｇ－ＭｅｉＨｓｉｅｈ在２００２年利用一个ＳＴＲ序列位点对大麻进行了遗传学分析，证明了大麻的这个ＳＴＲ位点有很高的遗传多态性［１２］。同年，ＳｉｍｏｎＧｉｌｍｏｒｅ也利用５个引物对９３个大麻品种进行了

结果表明，虽然毒品大麻和纤维大麻只有６％的遗传区别，但毒品大麻比纤维大麻ＳＴＲ序列分析［１３］。

具有更低的多态性。但这种区别不显著很难用于区别纤维大麻和毒品大麻，无法作为法律检测手第４期曾民等：大麻研究中的分子标记应用１９１

段。（转录单位间隔区）具有２００５年，Ｈｓｉｎｇ－ＭｅｉＨｓｉｅｈ利用分子标记技术发现了大麻ｒＤＮＡ内的ＩＧＳ多态性［１５］。这种序列也可用做分子标记。

２存在问题与展望

综上所述，分子标记技术在大麻上的应用是随着工业大麻产业的发展，毒品滥用问题的日益严

重，以及用常规方法进行大麻检测存在着严重缺点的情况下发展起来的。由于大麻的栽培历史悠久，且为雌雄异体、异花授粉（通常三公里以内的大麻品种间都有异花授粉的可能），所以大麻品种易混杂变异，使得工业大麻变异为有毒大麻品种或工业大麻品种不纯。在应用于大麻的分子标记中，由于ＲＡＰＤ技术不需要知道基因组的序列、快速、简便、成本相对较低而在大麻中得到广泛应用，但它的重复性和稳定性较差。不过通过将ＲＡＰＤ标记转化为ＳＣＡＲ（ＳｅｑｕｅｎｃｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ

ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＲｅｇｉｏｎ）标记会提高其稳定性。ＲＦＬＰ技术程序繁琐且成本高，标记结果也不好，所以很少

用于大麻分子标记。ＡＦＬＰ技术结合了ＲＦＬＰ和ＰＣＲ各自的优点，不需要Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，实验结果稳定可靠，但其费用贵，实验涉及面广，技术要求高，一般实验室难以展开。ＩＳＳＲ比ＲＡＰＤ可靠、重复性高、比ＡＦＬＰ方便，成本低，又不象ＳＳＲ要预先获得序列信息，也适用于大麻。而ＳＴＲ标记目前还不能用于大麻检测。近２０年来，虽然在大麻上的分子标记发展迅速，但一般只用于品种间的多态性、遗传差异和用于区别工业大麻和毒品大麻的法政检测，用于提供法律证据。目前，在我国分子标记在大麻上主要用于一些基础的科研工作，在大麻毒品检测方面还以常规检测方法为主，在品种鉴定，亲缘关系分析及来源推断方面还有待进一步研究。参考文献：

［１］ＷｉｌｌｉａｍｓＪＧＫ，Ｋｕｂｅｌｉｋ，ＬｉｖａｋＪＡ，ｅｔａｌ．ＤＮＡｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｍｐｌｉｇｉｅｄｂｙａｒｂｉｔｒａｒｙｐｒｉｍｅｒｓａｒｅｕｓｅｆｕｌａｓｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，１９９０，１８，６５３１－６５３６．

［２］ＷｅｌｓｈＪ，ＭｏｃｌｅｕａｎｄＭ．ＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｇｅｎｏｍｅｓｕｓｉｎｇＰＣＲｗｉｔｈａｒｂｉｔｒａｒｙｐｒｉｍｅｒｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９９０，１８，７２１３－７２１８．

［３］ＶｉｄｙａＪａｇａｄｉｓｈ，ＪａｍｅｓＲｏｂｅｒｔｓｏｎ，ＡｄｒｉａｎＧｉｂｂｓＲＡＰＤａｎａｌｙｓｉｓｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｓＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ１９９６，７９，１１３－１２１．

［４］ＳｉｌｖｉａＦｏｒａｐａｎｉ，ＡｎｄｒｅａＣａｒｂｏｎｉ，ＣｌａｕｄｉａＰａｏｌｅｔｔｉ，Ｖ．Ｍ．ＣｒｉｓｔｉａｎａＭｏｌｉｔｅｒｎｉ，ＰａｏｌｏＲａｎａｌｌｉ，ａｎｄＧｉｕｓｅｐｐｅＭａｎｄｏｌｉｎｏ，ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＨｅｍｐＶａｒｉｅｔｉｅｓＵｓｉｎｇＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＭａｒｋｅｒ［Ｊ］．ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ２００１，４１，１６８２－１６８９．

（３）：１８２－１８４．［５］宋书娟，刘卉，稍宏．大麻性别连锁的特异ＤＮＡ标记的初步研究［Ｊ］．中国药物依赖性杂志，２００１，１０

［６］陈其军，韩玉珍，傅永福，赵德刚，国凤利，孟繁静，刘卫平．大麻性别的ＲＡＰＤ和ＳＣＡＲ分子标记［Ｊ］．植物生理学报，（２）：１７３－１７８．２００１，２７

（５）：４－５．［７］苏友波，朱颖，林春，杨明．大麻ＲＡＰＤ分子标记的引物筛选［Ｊ］．中国麻业，２００２

［８］ＺｉｅｔｋｉｅｑｉｃｇＥ，ＲａｆａｌｓｋｉＡ，ＬａｂｕｄａＤ．Ｇｅｎｏｍｅ，ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｂｙｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ（ＳＳＲ）［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ，２０００，１０１，２４１－２４８．

［９］ＭａｒｅｓｈｉｇｅＫｏｊｏｍａ，ＯｓａｍｕＬｉｄａ，ＹｕｋｉｋｏＭａｋｉｎｏ，ＳｅｔｓｕｋｏＳｅｋｌｔａ，ＭｏｔｏｙｏｓｈｉＳａｔａｋｅ．ＤＮＡＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｏｆＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖｅＵｓｉｎｇＩｎ－ｔｅｒ－ＳｉｍｐｌｅＳｅｑｕｅｎｃｅＲｅｐｅａｔ（ＩＳＳＲ）Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．

［１０］ＺａｂｅａｕＭ，ＶｏｓＰ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｇｅｎｅｒａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ［Ｍ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＰａｔｅｎｔＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＰｕｂｌ，１９９３．

［１１］ＳｈａｎｎｏｎＬ，Ｄａｔｗｙｌｅｒ，Ｐｈ．ＤａｎｄＧｅｏｒｇｅＤ，Ｗｅｉｂｌｅｎ，Ｐｈ．Ｄ，ＧｅｎｅｔｉｃＶａｒｉａｔｉｏｎｉｎＨｅｍｐａｎｄＭａｒｉｊｕａｎａａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＡｍｐｌｉｆｉｅｄＦｒａｇ－ｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅ，２００６（５１）：３７１－３７５．

［１２］Ｈｓｉｎｇ－ＭｅｉＨｓｉｅｈ，Ｒｕｒ－ｊｙｕｎＨｏｕ，Ｌｉ－ＣｈｉｎＴｓａｉ，Ｃｈｉｈ－ＳｈｅｎｇＷｅｉ，Ｓｕ－ＷｅｎＬｉｕ，Ｌｉ－ＨｕｎｇＨｕａｎｇ，Ｙｉ－ＣｈｅｎＫｕｏ，ＡｄｒｉａｎＬｉｎａｃｒｅ，ＪａｍｅｓＣｈｕｎ－ＩＬｅｅ，ＡｈｉｇｈｌｙｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＳＴＲｌｏｃｕｓｉｎＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２００３，１３１，５３－５８．

［１３］ＳｉｍｏｎＧｉｌｍｏｒｅ，ＲｏｄＰｅａｋａｌｌ，ＪａｍｅｓＲｏｂｅｒｔｓｏｎ．Ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ（ＳＴＲ）ＤＮＡｍａｒｋｅｒａｒｅｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅａｎｄｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅｉｎＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｆｏｒｅｎｓｉｃｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２００３，１３１，６５－７４．

［１４］ＡｄｒｉａｎＬｉｎａｃｒｅ，ＪａｍｅｓＴｈｏｒｐｅ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｎｎａｂｉｓｂｙＤＮＡ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，１９９８，９１７１－７６．［１５］Ｈｓｉｎｇ－ＭｅｉＨｓｉｅｈ，Ｃｈｉａ－ＬｉｎｇＬｉｕ，Ｌｉ－ＣｈｉｎＴｓａｉ，Ｒｕｒ－ＪｙｕｎＨｏｕ，Ｋｕｏ－ＬａｎＬｉｕ，ＡｄｒｉａｎＬｉｎａｃｒｅ，ＪａｍｅｓＣｈｕｎ－ＩＬｅｅ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－ｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒＤＮＡＩＧＳｏｆＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａ［Ｊ］．ＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２００５，１５２，２３－２８．

ＲｅｓｅａｒｃｈＡｄｖａｎｃｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＭａｒｋｅｒｉｎＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．

ＺＥＮＧＭｉｎ１，ＧＵＯＨｏｎｇ－ｙａｎ２，ＨＵＸｕｅ－ｌｉ２，ＸＵＹａｎ－ｐｉｎｇ２，ＹＡＮＧＭｉｎｇ２

（１．ＦａｃｕｌｔｙｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ＆Ｂｉｏ－ｔｅｃｈｎｉｃ，ＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ；２．ＥｃｏｎｏｍｉｃＣｒｏｐＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ，ｆｏｒｉｎｓｔａｎｃｅＲＡＰＤ，ＡＦＬＰ，ＩＳＳＲ，ＳＴＲａｎｄＩＧＳｗｈｉｃｈｂａｓｅｄｏｎＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｂｅｇａｎｔｏｂｅｕｓｅｄｉｎＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａｓｔｕｄｙ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｎａｌｙｓｅｄｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓａｎｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ