．ｒｔｎ￣＝养中病原菌的分布及耐药性的分析 赵红艳，王 莉，李 昕，姜美臣，张贺，李 蕾 （黑龙江省鸡西市矿业集团总医院 检验科，黑龙江鸡西１５８１００） （中图分类号］Ｒ４４６ ［文献标识码］Ｂ ［文章编号］１００２—２３７６（２０１２）０３—００２２—０３ ［摘要］目的：了解我院菌血症或败血症患者血培养阳性标本中分离的病原茵分布及耐药情况，指导 临床合理使用抗生素。方法：将血培养瓶放入３５℃温箱培养，细茵鉴定和药敏采用法国梅里埃ＡＴＢ半自动细 菌鉴定／药敏分析仪，Ｋ—Ｂ纸片扩散法。结果：２０１０．０６—２０１１．ｏ６期间，我院共有８２３例血培养标本，检出血 培养阳性标本１４８株，其中革兰氏阳性菌１０４株，革兰阴性茵４４株，占总数的１２．６％和５．３％。革兰氏阳性茵 １４０株，以凝固酶阴性的葡萄球菌为主，耐药性较高的有一例ＭＲＳＡ和六例ＭＲＳＥ。革兰氏阴性茵以大肠埃希 茵为主，ＥＳＢＬｓ阳性的大肠埃希茵是１４株，肺炎克雷伯肺炎亚种２株。结论： 血培养所分离的病原菌以革 兰阳性茵为主，而且茵种多样化，具有较高的耐药性，尤以ＭＲＳＡ、ＭＲＳＥ及肠球茵的耐药性高；革兰阴性茵 中ＥＳＢＬｓ阳性的比例也很高，所以，临床医生对发热的患者在使用抗生素前应尽旱、多次不同部位采集血液 做血培养，以便合理应用抗生素，提高治愈率。 ［关键词］血培养；细茵耐药；微生物敏感性试验 血行感染是临床常见的严重的感染性疾病，具 年来血培养进行回顾性调查分析，并对其细菌构成 有起病急、病死率高的特点。血培养是菌血症或败 比进行病原菌耐药分析，为指导临床医生合理使用 血症的细菌学检验的基本方法，并且广泛应用于发 抗生素提供有力的依据，从而提高治愈率，对降低 热、新生儿肺炎、肿瘤放疗、化疗病人的监测，并 死亡率有重要意义。 做为诊断的重要依据。目前，我院耐药菌株逐渐增 １资料与方法 多，对病人的治疗受到严重影响。下面对我院近１ １．１一般资料 调选我院２０１０年６月 ０１１年６月期间，８２３ 收稿日期：２０１２—０１—０５ 例发热患者的血培养标本结果。 ３讨论 床酶学检验标准化检验仪器的要求，因此不同仪器 目前临床实验室用于测定乳酸脱氢酶的原理如 在同时投入使用前必须进行对比实验。我们选用 下面化学反应公式所示： ２５份临床标本同时利用两种方法测定ＬＤＨ，通过 Ｔｎ１－１ 乳酸＋ＮＡＤ＋ 丙酮酸＋ＮＡＤＨ＋Ｈ ，在 直线回归证实两种方法有很好的相关性，并且根据 ＬＤＨ的催化下乳酸与丙酮酸之间发生可逆反应， 回归方程对ＶＩＴＲＯＳ ２５０全自动生化分析仪结果校 在这个过程中会生成或消耗ＮＡＤＨ，而ＮＡＤＨ在 正后，与ＯＬＹＭＰＵＳ ＡＵ４００全自动生化分析仪结果 ３４０ ｎｍ波长下会有吸收峰，通过在３４０ｎｍ波长下 无显著性差异。通过相关性分析及结果的校正，使 连续测定ＮＡＤＨ增加或减少的量，可以转化算出 两种不同方法测定ＬＤＨ的结果无显著性差异，实 ＬＤＨ活性。本实验室测定ＬＤＨ就包含上述的两种 现了两种测量方法的统一，为临床医生阅读化验单 方法，其中ＯＬＹＭＰＵＳ ＡＵ４００全自动生化分析仪采 带来了方便。 用的是顺向反应，ＶＩＴＲＯＳ ２５０全自动生化分析仪 ［参考文献］ 采用的是逆向反应，由于反应方向的不一致，造成 ［Ｉ］王凤学，安邦权．临床生物化学自动分析操作规程 检测结果不一致而导致临床混乱。如何使不同的检 ［Ｍ］．北京，人民军医出版社，２００６．８８． 测系统相统一，使检测结果相一致是当今临床医学 ［２］文庆成．临床酶测定标准化的几个问题［Ｊ］．中华医 检验实验室标准化和规范化要解决的问题，也是临 学检验杂志，１９９８，２１（１）：６０—６１ ２２ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｖｏ１．２５，Ｎｏ．０３ １．２方法 表１ １４８株病原菌的构成比（％） 病原菌 株数 构成比（％） 将血标本注入法国梅里埃的血培养瓶进行培 养，对阳性的标本或溶血、浑浊的标本转种血平 板、分离、纯培养，１８—２４ ｈ后上卡，鉴定及药 敏分析。除了上卡做药敏的抗生素之外，还要手工 多加些药敏纸片做药物敏感试验，采用Ｋ—Ｂ纸片 金黄色葡萄球菌 链球菌 微球菌 肠球菌 凝固酶阴性葡萄球菌 假白喉棒状杆菌 *滑假丝酵母 ８ ８ ｌ０ ２２ ５０ ４ ２ ５．４ ５．４ ６．８ １４．９ ３３．８ ２．７ １．４ 扩散法，药敏结果按美国临床实验室标准委员会 （ＮＣＣＬｓ）２００５版【１】的要求进行判断。操作过 程严格按照《全国临床检验操作规程》进行，标 准菌株为金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３、大肠埃希 菌ＡＴＣＣ２５９２２、铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３，，由黑 龙江省临床检验中心提供。 １．３试剂与药敏纸片 试剂和血培养瓶是由法国梅里埃公司生产的， 血培养瓶有两种：成人瓶和儿童瓶。分离培养所用 的哥伦比亚琼脂、中国蓝琼脂、Ｍ—Ｈ琼脂均购自 法国梅里埃公司，药敏纸片购自杭州天和微生物试 剂有限公司。 １．４药敏试验 药敏试验采用Ｋ—Ｂ纸片扩散法。用头孢噻 肟，头孢噻月亏／克拉维酸；头孢他啶，头孢他啶／克 拉维酸两组纸片扩散法检测超光谱１３一内酰胺酶 （ＥＳＢＬｓ）；耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ），通过检 测头孢西丁纸片扩散法来证实；高耐氨基糖苷类肠 球菌（ＨＬＧＲ），采用Ｍ—Ｈ琼脂１２０ｕｇ／片的庆大 霉素纸片做测定，标准判断均按美国临床实验室标 准化委员会（ＮＣＣＬｓ）２００５版的药敏结果进行判 断。 １．５统计分析 用ＷＨＯＮＥＴ５．１软件进行统计学分析。 ２结果 病原菌的分离率与构成比２０１０年６月一２０１１ 年６月期间共分离出１４８株阳性菌株，其中革兰氏 阳性菌株１０４株（７０．２７％）；革兰氏阴性菌４４株 （２９．７３％）。病原菌在医院的分布情况为１４８株阳 性菌分布于７个科室，分别为儿科病房７６株，消 化内科３９株，ＩＣＵ监护室１６株，ＣＣＵ监护室１Ｏ 株，内科门诊２株，肾内科３株，儿科门诊２株。 分另０占５１．４％、２６．４％、１０．８％、６．８％、１．４％、 ２．０％、１．４％。 ２．１血培养阳性病原菌的构成比见表１ ２．２主要血培养检出菌的耐药情况 药物敏感试验显示致病菌对多种抗菌药物显示 医疗装备２０１２第０３期 嗜麦芽窄食单胞菌 ３ ２．Ｏ 甲型副伤寒沙门氏菌 ２ １．４ 豚鼠气单胞菌 １ Ｏ．７ 肺炎克雷伯肺炎亚种 ８ ５．４ 大肠埃希菌 ３０ ２Ｏ．３ 较高的耐药性。革兰氏阳性菌对万古霉素均敏感， 对呋喃妥因、米诺环素、头孢哌Ｎ／舒巴坦、利福 平耐药率较低，对其余抗菌素的耐药率较高。革兰 氏阴性菌除嗜麦芽窄食单胞菌天然耐亚胺培南外， 其他的均敏感，耐药率从低到高依次为头孢哌酮／ 舒巴坦、哌拉西 他唑巴坦、磷霉素、阿米卡星， 其余的抗菌素耐药率均较高。主要的革兰氏阳性 菌、革兰氏阴性菌对常用药物的耐药情况见表２和 表３。 革兰氏阳性菌的耐药性见表２，金黄色葡萄 球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌对青霉素、阿奇霉 素、复方新诺明的耐药率极高，提示它们已不再 是治疗葡萄球菌败血症的首选药物；但对万古霉 素、米诺环素、呋喃妥因的耐药率为０，应作为 首选药物。耐甲氧西林的凝固酶阴性的葡萄球菌 （ＭＲＣＮＳ）高于耐它的金黄色葡萄球菌（ＭＲ． ＳＡ）；肠球菌的耐药率也很高。所以，在临床上 根据具体情况合理使用抗生素，减少院内感染， 有利于疾病的治疗。 革兰氏阴性杆菌对常用抗生素的耐药情况见表 ３，肠杆菌科的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是我院 近年来临床败血症分离出阴性杆菌中较多的细菌， 从常用的抗生素的耐药性来看，对亚胺培南、头孢 哌酮／舒巴坦的耐药率为０；其次是哌拉西林／他唑 巴坦、磷霉素和阿米卡星，其他的耐药率均较高。 由于ｐ一内酰胺类抗生素在临床上广泛应用，本院 检出产超广谱酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在阴 性杆中所占的比率分别为３１．８％、４．５％。 ２３ 表２主要革兰氏阳性菌对常用抗生素的耐药率 葡萄球菌 金黄色 凝固酶阴性 葡萄球菌 肠球菌 ｎ 抗菌药物 （耐药 耐药 （耐药 耐药 （耐药 耐药 株数） 窒 株数室 窒 ） 株数） ８ ％ ５０ ％ ２２ ％ 米诺环素 Ｏ ０．０ Ｏ Ｏ．０ ｌＯ ４５．５ 呋喃妥因 ０ Ｏ．Ｏ ０ Ｏ．０ ７ ３１．８ 左氧氟沙星 ３ ３７．５ ２５ ５０．ｏ ｌＯ ４５．５ 氧氟沙星 ４ ５Ｏ．Ｏ ｌ５ ３Ｏ．０ １４ ６３．６ 青霉素 ８ ｌ００．Ｏ ５０ １ｏｏ．Ｏ ８ ３６．４ 四环素 ０ ０．０ ２５ ５Ｏ．０ １６ ７２．７ 庆大霉素ｌ０ ｇ ６ ７５．Ｏ ２ｌ ４２．Ｏ 庆大霉素１２０ Ｉｘｇ ６ ２７．３ 阿米卡星 ２ ２５．０ Ｏ ０．Ｏ 磷霉索 ３ ３７．５ ２６ ５２．０ ｌｌ ５０．０ 阿奇霉素 ８ ｌＯＯ．ｏ ３９ ７８．ｏ ｌ５ ６８．２ 万古霉素 ０ ０．Ｏ Ｏ Ｏ．Ｏ ０ Ｏ．０ 头孢西丁 １ ｌ２．５ ６ １２．０ 复方新诺明 ７ ８７．５ ３７ ７４．Ｏ 头孢哌酮／舒巴坦 ８ ３６．４ 利福平 ０ ８ １６．０ ９ ４０．９ 表３主要革兰氏阴性菌对常用抗生素的耐药率 大肠埃希菌 肺炎克雷伯 嗜麦芽窄食 肺炎亚种 单胞菌 抗菌药物 株数）（耐药 耐药 （耐药 耐药 盎 窒 （耐药 室 耐药 株数） 株数） ３０ ％ ８ ％ ３ ％ 氨曲南 １５ ５Ｏ．Ｏ ３ ３７．５ 头孢米诺 ｌ０ ３３．３ ４ ５Ｏ．０ 哌拉西林／他唑巴坦 ２ ６．７ ２ ２５．Ｏ 磷霉素 ２ ６．７ ２ ２５．Ｏ 亚胺培南 ０ Ｏ．Ｏ Ｏ Ｏ．Ｏ 复方新诺明 ２０ ６６．７ ５ ６２．５ １ ３３．３ 阿米卡星 ６ ２０．Ｏ ２ ２５．０１ ３３．３ 氨苄西林 ２４ ８０．０ ８ ｌ０Ｈ０．ｏ 头孢他啶 １４ ４６．７ ２ ２５．０ 头孢哌酮／舒巴坦 Ｏ Ｏ．Ｏ Ｏ Ｏ．Ｏ 头孢吡肟 １４ ４６．７ ２ ２５．ｏ 庆大霉素ｌＯ ｇ ｌ８ ６０．Ｏ ２ ２５．０ ３ ｌｏｏ．０ 左氧氟沙星 ２２ ７３．３ ０ ０．０ １ ３３．３ 头孢唑啉 １６ ５３．３ ５ ６２．５ 米诺环素 ｌ ３３．３ ３讨论 败血症即病原菌侵入血流并在其中大量繁殖， 产生毒性代谢产物，引起严重的全身中毒症状，如 不及时治疗，预后较差。随着医疗水平的提高，各 种介入性检查治疗、器官移植技术的广泛开展和广 谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的广泛应 用，临床败血症的发病率有所提高，且耐药菌株逐 ２４ 渐增多。血培养及药敏试验是确定败血症诊断治疗 的重要依据，也是准确治疗败血症的关键步骤之 一。因此，临床上疑为败血症者如高烧、寒颤等， 必须尽快做血培养检测，且要多次采集不同部位的 血液，以便给患者更早的诊断和合理的治疗。 国内相关文献报导，显示血培养阳性率大多在 １０％左右，本院血培养阳性率为１８％，高于文献 报导，考虑是近年来败血症的发病率有所提高或有 污染的可能。临床抗生素的不合理使用，使致病细 菌的耐药性变得较为普遍，革兰氏阳性菌对常用抗 生素的耐药问题较严重，对青霉素、阿奇霉素、复 方新诺明、庆大霉素、氧氟沙星耐药率相当高；革 兰氏阴性菌除产ＥＳＢＬｓ的大肠埃希菌１４例和肺炎 克雷伯菌２例耐药性较高外，嗜麦芽窄食单胞菌耐 药率也很高，只有少数药物敏感。 目前，我国虽然尚未发现耐万古霉素的葡萄球 菌，但其他国家已多次报导分离出该类菌株。提醒 临床医生要慎用万古霉素，以防耐药菌株的产生。 产ＥＳＢＬｓ的菌株对环丙沙星、丁胺卡那、左氧氟 沙星、复方新诺明耐药严重，提示产ＥＳＢＬｓ的菌 株多数为多重耐药，携带ＥＳＢＬｓ基因的质粒常同 时携带氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类抗菌药等的 耐药基因，从而对多种药物耐药。 综上所述，由于各类抗生素的广泛应用，导致 细菌的耐药率不断增高，应引起高度重视。掌握败 血症主要病原菌的耐药性对指导临床用药有一定的 作用。 ４小结 血培养病原菌及细菌耐药性监测是临床了解病 原菌的变迁和耐药率变化规律的重要手段，也是指 导临床医生合理使用抗生素的重要依据，这有助于 减少或延缓耐药菌株的产生。 ［参考文献］ ［１］杨敬芳，李继红，王鑫，等．６４４５份血培养分离菌的 分布特征及耐药谱型研究［Ｊ］．中华医院感染学杂 志，２００３，１３（６）．５７５—５７７． ［２］余雪涛，方伟强．８ｌ例败血症患者致病菌及其耐药性分析 ［Ｊ］．中国微生态学杂志，２ＯＯ２，１４（４）：２２７—２２８． ［３］陈敏，周陶友，陈文昭，等．耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌感染的临床和耐药性［Ｊ］．中华医院感染学杂 志，２００４，１４（２）：２２３—２２５． ［４］杨立军，朱立华，徐国宾，等．产超广谱ｐ一内酰胺 酶的大肠埃希菌耐药菌株中整合子基因研究［Ｊ］．中 华检验医学杂志，２００３，２６（７）：４３６—４３８． Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｖｏ１．２５，Ｎｏ．０３
