第4期(总第350期) 2014年4月 农产品加工(学刊) Academic Periodical of Farm Products Processing No.4 Apr. 文章编号:1671—9646(2014)04b一0016—03 龙葵抑菌活性研究 郝鑫,林柯,李延花, 谢春阳 1301 18) (吉林农业大学食品科学与工程学院,吉林长春摘要:龙葵作为野生植物,其果实除了具有食用价值外还有一定的药理作用。采用滤纸片法研究龙葵果浸提汁原 液对大肠杆菌、酵母菌、黑曲霉菌的抑菌活性。结果表明,龙葵汁溶液对大肠杆菌、酵母菌、黑曲霉均有明显的 抑菌效果,最终确定其最低抑菌质量浓度(MIC)分别为0.062 50—0.125 O0 也,0.062 50 0.125 O0咖L,0.031 25 0.062 50 ̄mL。 关键词:龙葵;浸提汁;抑菌活性 中图分类号:TQ450 文献标志码:A cloi:10.3969/jissn.1671—9646(X).2014.04.033 Antimicrobial Activities of the Extracts from Solanum Nigrum L. HAO Xin,I.IN Ke,LI Yan-hua,"XIE Chun-yang (Department of Food Science and Engineeirng,Jilin Agricultural University,Changehun,Jilin 130118,China) Abstract:As a wild plnt,tahe fruit of Solanum nigrum L has a certain pharmacological action,in addiiton to its food value.The antibacterila activiites ofthe extractive juice from het Solarium Nigrum L for Escherichia coli,yeast and Aspergillus ale studied by he method otf filtering paper.The substances extracted show some antibiotic activity against Escherichia coli,yeast and Aspe ̄llus,the minimum antibiotic concentration to the bacteria rnge abetween 0.062 50 ̄0.125 00 g/mE,0.062 50 ̄0.125 00 g/mL,0.031 25-0.062 50 g/mE,respectively. Key word8-"Solanum Nigrum L.;extractive;antimicrobil actiavity 龙葵为茄科茄属一年生草本植物,俗名黑天天、 氯化钠、硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、 苦葵等【l_2J。果实生时青色,成熟时变成紫黑色f31,广 硫酸亚铁、蔗糖,均为分析纯。 泛分布于我国各省。民间常做小果食用,营养成分 丰富,属于尚未被开发利用的野生特产资源。 龙葵除了作为果实食用外,也具有重要的药用 价值。国内外大量学者研究报道已证实,龙葵在抗 肿瘤、抑菌、抗病毒方面均有一定的作用 ,在神 经药理作用及泌尿系统药理作用方面也有相关报 道 。但是目前,有关龙葵抑菌作用的报道大都是 医药领域,对食品领域的抑菌作用报道较少,所以 本试验初步研究了龙葵汁浸提原液对食品中几种常 见菌的抑制效果。 1材料与方法 1.2仪器与设备 01J2003—04型立式压力蒸汽灭菌筒,上海东亚压 力容器制造有限公司产品;sw—cJ—ZD型双人单面净 化工作台,苏州净化设备有限产品;SPX一250B—Z型 生化培养箱、SPX一250B—D型振荡培养箱,上海博讯 实业有限公司医疗设备厂产品;KYC一100C型空气恒 温摇床,上海新苗医疗器械制造有限公司产品; DM一1000型光学显微镜;UV2300型紫外可见分光光 度计,上海天美科学仪器有限公司产品;DW—FL90型 数字酸度计,上海鹏顺科学仪器有限公司产品; FA2004型电子天平,上海上平仪器公司产品。 1-3试验方法 1.3.1培养基的制备 1.1材料与试剂 龙葵果:采自吉林农业大学周边田野。 (1)查氏培养基。硝酸钠3 g,磷酸氢二钾1 g, 试验菌种:大肠杆菌、黑曲霉、酵母菌,均由 硫酸镁(MgSO ・7H O)0.5 g,氯化钾0.5 g,硫酸亚 吉林农业大学食品科学与工程学院实验室提供。 铁0.01 g,蔗糖30 g,琼脂20 g,蒸馏水1 000 mL, 试验试剂:牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂粉、 加热溶解,分装与三角瓶内,于121℃条件下灭菌。 收稿日期:2014—02—12 作者简介:郝鑫(1988一),女,在读硕士,研究方向为农产品加工。 通讯作者:谢春阳(1966一),男,副教授,硕士生导师,研究方向为农产食品加工工艺与应用。 2014年第4期 郝鑫,等:龙葵抑菌活性研究 (2)马铃薯葡萄糖琼脂培养基。去皮马铃薯 菌液体培养基使总体积达到20 mL。如此,培养基中 300 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,蒸馏水l 000 mL圈。 将马铃薯去皮切块,加1 000 mI 蒸馏水,煮沸20 min, 4层纱布过滤,补加蒸馏水至1 000 mL,加入葡萄 糖和琼脂,加热溶化,分装于三角瓶中,121 oC高压 灭菌20 min ̄]。 (3)牛肉膏蛋白胨固体培养基。牛肉膏3 g,蛋 白胨10 g,氯化钠5 g,琼脂20 g,蒸馏水1 000 mL, 加热溶解,用酸度计调节pH值为7.2~7.4,分装于 的龙葵汁溶液质量浓度分别为0.500 00,0.250 00, 0.125 00,0.062 50,0.031 25 g/mL。再加入200 L 菌悬液振荡摇匀,用分光光度计于波长600 nm处测 定初始吸光度,然后放入培养箱中在适宜温度下培 养。黑曲霉分别在8,16,24,32,40,48 h后测定 样品的吸光度;大肠杆菌和酵母菌分别在4,8,12, 16,20,24 h后测定样品吸光度。以吸光度随时间 变化反应培养基浊度变化,从而体现出微生物数量 三角瓶中高压灭菌 。 1.3.2菌种的预处理 将试验中用到的3种受试菌种分别接种于营养 培养基上,在36℃条件下培养72 h,从长出的菌落 中挑取1个纯化菌落接种于斜面试管培养基中培养, 备用【lH习。 1.3.3菌悬液的制备 受试菌种在斜面固体培养基中培养一定时间后, 在无菌环境中将无菌生理盐水倒入试管,振荡摇匀, 制成含有该菌种的菌悬液f13】。 1.3.4龙葵浸出物的制备 将新鲜龙葵果清洗后,用研钵粗破碎,4层纱布 过滤,得到滤液即龙葵原果汁,备用。 1.3.5滤纸片法测定抑菌活性 测定龙葵汁溶液的抑菌效果,采用滤纸片法。 通过测定大肠杆菌、酵母菌和黑曲霉菌的抑菌圈直 径来判断对受试菌种是否具有抑菌作用,同时可以 基本确定抑菌能力强弱。 (1)首先制备滤纸片,用打孔器将滤纸制成直 径6 mm的小圆纸片 悯,放入培养皿中进行高温高 压灭菌,灭菌条件为121℃ 无菌操作下将灭菌后 的滤纸片放人待试龙葵汁溶液中浸泡5 h,然后移入 干燥箱进行干燥,备用。 (2)在无菌操作下,用无菌移液管分别吸取各 受试菌种的菌悬液于固体平板培养基中,制成含菌 平板,放人培养箱培养I h。培养结束后,移入超净 台,将滤纸片贴于菌平板中,每个平板贴4片,其 中1片为浸泡过无菌蒸馏水的滤纸片作为对照试验, 重复3组。 (3)将各平板置于相应环境条件的恒温培养箱 中培养,分别为大肠杆菌37℃培养24 h【 ・踟;黑曲 霉30℃培养48 h;酵母菌28℃培养24 h。培养时 间结束后,观察抑菌情况,测定抑菌圈直径,取 3组滤纸片直径的平均值作为测量结果,以此评定抑 菌效果。 1.3.6最低抑茵质量浓度(MIC)测定 用无菌移液枪分别量取质量浓度为1.0 g/mL的 龙葵汁溶液10.000,5.000,2.500,1.250,0.625 mL 加人到5个无菌锥形瓶中,再加人预先配制好的无 的变化[19-2o]。每个质量浓度做3次重复,同时以加入 菌悬液但未加人龙葵汁的培养基作为对照。将试验 所得数据绘制抑菌曲线,根据微生物生长变化情况 确定最低抑菌质量浓度。 2结果与分析 2.1龙葵浸出物抑菌活性结果 龙葵浸出物的抑菌活性效果见表1。 表1龙葵浸出物的抑菌活性效果d,mm 菌种 抑菌圈直径 菌种 抑菌圈直径 大肠杆菌 9.3 黑曲霉 l0 酵母菌 12 从表1可以看出,龙葵汁溶液对大肠杆菌、酵 母菌、黑曲霉均有抑菌作用。其中抑菌效果最好即 抑菌圈最大的为酵母菌,其次为黑曲霉,抑菌圈相 对较小的为大肠杆菌。 2.2龙葵浸出物最低抑菌质量浓度 利用含有不同质量浓度龙葵汁溶液的培养基对 受试3个菌种进行培养,通过测定培养基吸光度, 得出培养基吸光度随时间变化的曲线,根据曲线变 化情况判断确定了龙葵汁溶液对各受试菌种的最低 抑菌质量浓度。 龙葵汁溶液对大肠杆菌的抑制效果见图1。 2・O 1_5 1.0 。0.5 O 时间t,h ◆一对照;l-一0.031 25 g,mL;--&-一0.062 50 hlL; O--0.12500 g/mL;f--0.25000咖L;+-0.50000咖L 图1 龙葵汁溶液对大肠杆菌的抑制效果 从图1可以看出,对照组试验测得的吸光值升 高幅度最大,由此说明在没有龙葵汁溶液的培养基 中,大肠杆菌生长状态良好。当培养基中龙葵汁 质量浓度为0.062 50 g/mL以下时(如质量浓度为 0.062 50 g/mL或0.031 25 g/mL时),培养基的吸光 农产品加工(学刊) 2014年第4期 度也随时间变化逐渐升高,由此说明在此质量浓度 下的龙葵汁溶液对大肠杆菌没有起到抑制作用;当 培养基中龙葵汁质量浓度大于0.125 00 g/mL时,培 养基的吸光度没有随时间而升高。说明在浓度为 0.125 00 g/mL以上时大肠杆菌的生长受到了明显的 抑制,龙葵汁对抑制大肠杆菌生长起到了较强作用, 具有明显效果。由此确定龙葵汁溶液对大肠杆菌的 最低抑菌质量浓度为0.062 50—0.125 00 g/mL。 龙葵汁溶液对酵母菌的抑制效果见图2。 2・O 体现在培养基中龙葵汁溶液质量浓度为0.031 25 g/mL 的组中,培养基的吸光度随时间变化而升高但整体 低于对照组。当培养基中的龙葵汁溶液质量浓度为 0.062 50 g/mL以上时,培养基的吸光度虽然随着时间 变化而升高,但是升高幅度很小,说明当培养基中龙 葵汁溶液质量浓度大于0.062 50 g/mL时,黑曲霉菌 种的生长开始受到了明显抑制。由此可以确定龙葵汁 溶液对黑曲霉菌的最低抑菌质量浓度为0.031 25~ 0.062 50 g/mL。 3结论 i型1・5 1.0 。0.5 0 0 4 8 l2 l6 20 24 时间t/h ◆一对照;-II-一0.031 25 g/mL;—●r一0.062 50g/mL; -II--0.125 00 g/mL;*一0.250 00 g/mL;—.--0.500 00 g/mL 图2龙葵汁溶液对酵母菌的抑制效果 从图2可以看出,对照组试验测得的吸光度随 时间变化而升高幅度最大,说明此组培养基中在没 有龙葵汁溶液的情况下,酵母菌的生长状态良好。 这种情况同样表现在培养基中龙葵汁溶液质量浓度为 0.062 50 g/mL和龙葵汁溶液质量浓度为0.03 1 25 g/mL 两组中,随着时间延长,2组培养基吸光度均升高。 由此说明,在龙葵汁溶液质量浓度为0.062 50 g/mL 或0.031 25 g/mL时,对酵母菌没有起到抑制作用; 而当培养基中龙葵汁溶液质量浓度大于0.125 00 g/mL 时,培养基的吸光度没有随时间延长而升高,说明 当培养基中龙葵汁溶液质量浓度大于0.125 00 g/mL 时酵母菌的生长受到了明显的抑制。试验表明,龙 葵汁对抑制酵母菌生长起到了较强的抑制作用。由 此确定龙葵汁溶液对酵母菌的最低抑菌质量浓度为 0.062 50 ̄0.1 25 00 g/mL。 龙葵汁溶液对黑曲霉的抑制效果见图3。 3・0 2.5 趔2.0 1.5 。l・0 0・5 O 时间t/h ◆一对照;--II--0.031 25 g/mL;-/k---0.062 50咖L; II--0.125 00 g/mL;--)<--0.25000 g/mE;-e--0.50000 e ̄mL 图3龙葵汁溶液对黑曲霉的抑制效果 从图3可以看出,对照组试验测得的吸光度随 时间变化而升高幅度最大,说明在没有龙葵汁溶液 的培养基中,黑曲霉菌生长状态良好。这种情况同样 抑菌效果试验结果表明,龙葵汁溶液对大肠杆 菌、酵母菌、黑曲霉均有一定抑菌作用,其最低抑 菌质量浓度分别为0.062 50~0.125 00,0.062 50~ 0.125 00,0.031 25~0.062 50 g/mL。 参考文献: 【1】 付涛,付燕,张勇,姜鑫.龙葵的经济价值及栽培fJ1. 中国林副特产,2011(2):46. 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