龙葵果花色苷的分离与鉴定

５６　２０１６，Ｖｏ１．３７，Ｎｏ．０７　良晶科学　※基础研究　龙葵果花色苷的分离与鉴定　腾飞，郑悦，王萍　（东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨　１５００４０）　摘要：采用硅胶柱层析技术分离制备龙葵果花色苷。分离得到的２个花色苷馏分经紫外一可见光谱、高效液相色　谱－电喷雾串联质谱（ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｒｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＨＰＬＣ—ＤＡＤ—　ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ）进行结构鉴定，并结合酸水解分析糖苷种类。最终确定馏分Ｉ为飞燕草素．３．琥珀酰阿拉伯糖苷，根　据峰面积归一化法计算其纯度为９４％；馏分ＩＩ为矢车菊素．３．半乳糖苷和矢车菊素．３．乙酰半乳糖苷，峰面积归一化　法计算其纯度分别为４５．６７％和ｌ３．９７％。　关键词：龙葵；花色苷；分离；鉴定；高效液相色谱．电喷雾质谱联用；酸水解　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．Ｆｒｕｉｔｓ　ＴＥＮＧ　Ｆｅｉ，ＺＨＥＮＧ　Ｙｕｅ，ＷＡＮＧ　Ｐｉｎｇ，ｌ：　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ　１５００４０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．ｆｒｕｉｔｓ　ｂｙ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅｍ　ｂｙ　ＵＶ—ｖｉｓｉｂｌｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—－ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＨＰＬＣ－ＤＡＤ·ＥＳＩ—ＭＳ／ＭＳ）．Ａｃｉｄ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ．Ｔｈｒｅｅ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ　ｉｎ　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．ｆｒｕｉｔｓ．Ｏｎｌｙ　ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ－３一　ｓｕｃｃｉｎｙｌａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｉ（ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗａｓ　９４％），ｗｈｉｌｅ　ｂｏｔｈ　ｃｙａｎｉｄｉｎ一３一ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ（ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗａｓ　４５．６７％）ａｎｄ　ｃｙａｎｉｄｉｎ一３一ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ（ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗａｓ　１３．９７％）ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ＩＩ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｒｏｍ　ｆＳｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．ｆｒｕｉｔｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．；ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｒｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＨＰＬＣ—ＤＡＤ—ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ）；ａｃｉｄ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ＤＯＩ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２－６６３０—２０１６０７０１１　中图分类号：ＴＳ２０１．１　引文格式：　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２．６６３０（２０１６）０７—００５６—０６　腾飞，郑悦，王萍．龙葵果花色苷的分离与鉴定【Ｊ】．食品科学，２０１６，３７（７）：５６．６１．ＤＯＩ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２—６６３０—　２０１６０７０１　１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｐｋｘ．ｎｅｔ．ｃａ　ＴＥＮＧＦｅｉ，ＺＨＥＮＧＹｕｅ，ＷＡＮＧＰｉｎｇ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓｆｒｏｍＳｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍＬ．ｆｒｕｉｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２０１６，３７（７）：５６—６１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）ＤＯＩ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２—６６３０—２０１６０７０１　１．ｈｔｔｐ：＃ｗｗｗ．ｓｐｋ）（．ｎｅｔ．ｃｎ　龙葵（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．）为一年生草本植物，属　于茄科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）茄属（Ｓｏｌａｎｕｍ），又名黑星星、　目前对龙葵的研究大多集中在对龙葵生物碱和多　糖的研究【５］，而对龙葵色素的研究起步较晚。目前已开　展了对该色素提取及稳定性方面的研究，张贺等　通过　正交试验确定龙葵果红色素提取最优工艺，建立了以提　取温度、提取时间为影响因素的提取龙葵果红色素影响　因素统计模型。范翠丽等【１　研究了常温提取、水浴锅热　提取、微波辅助提取和超声波辅助提取对龙葵果色素的　影响，并对龙葵果红色素的浸提条件及浸提方法进行了　系统研究，筛选出龙葵果红色素的最佳提取方法及工艺　黑呦呦、黑天天、野葡萄等。龙葵全草高３０～１２０　ｃｍ，　白色聚伞花序，球形浆果，其果实未成熟时为绿色，成　熟后为黑紫色　Ｊ。龙葵全草含矿物质、氨基酸、维生素等　营养成分，还含有苷类甾体生物碱、多糖、酯、酚类化　合物和皂苷等活性成分口］。龙葵在全国范围内均有分布，　且已有成熟的栽培技术。成熟的龙葵果含有丰富的红色　素，是一种极具开发价值的资源　］。龙葵全草均可入药，　研究发现龙葵具有抗肿瘤，抗菌和抗病毒，抗炎与抗休　克等功能，同时还对神经系统和泌尿系统有药理作用　Ｊ。　收稿日期：２０１５—０５—１１　条件。木合塔尔·吐尔　研究了戈壁野生龙葵果紫红　色素的提取条件和理化性质，得出该色素在酸性条件下　基金项目：黑龙江省卓越农林人才教育培养计划改革试点项目（４１　１　１０２１　１）　作者简介：腾飞（１９９０一），女，硕士，研究方向为功能食品。Ｅ—ｍａｉｌ　ｔｅｎｇｆｅｉｓｉｙｕ＠１２６．ｃｏｍ　通信作者：王萍（１９６４一），女，教授，博士，研究方向为植物活性成分提取及功能。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｐｉｎｇｎｅｆｕ＠１２６．ｃｏｒｎ　※基础研究　良晶科学　２０１６，ＶｏＬ３￣，Ｎｏ．０７　５７　具有较好的稳定性，并且对光、热和常用食品添加剂都　比较稳定。然而对于龙葵花色苷的成分及结构还未见报　道，本实验利用柱层析将龙葵果花色苷分离，并采用高　效液相色谱．电喷雾串联质谱联用仪（ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｒｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＨＰＬＣ．ＤＡＤ—ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ）对分离得到的龙　葵果花色苷分子质量和分子结构进行鉴定，为开发和综　合利用龙葵资源提供理论依据。　１　材料与方法　１．１　材料与试剂　龙葵果于２０１４年９月采于东北农业大学校园内，采摘　的新鲜龙葵果于一１８℃冷冻保藏。　甲醇（色谱纯）　美国Ｆｉｓｈｅｒ公司；纯净水　娃　哈哈集团；Ｄ－葡萄糖、Ｄ．半乳糖、Ｄ．果糖、　．鼠李糖、　Ｄ．甘露糖、Ｄ．木糖、三．阿拉伯糖（色谱纯）　上海源叶　生物技术有限公司；柱层析硅胶（２００￣３００目）　青岛　海洋化工厂；Ｘ．５大孔树脂　南开大学化工厂；其他试　剂均为国产分析纯。　１．２　仪器与设备　Ａｇｉｌｅｎｔｌ１００型高效液相色谱．电喷雾质谱联用仪、　Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０型高效液相色谱仪（配有示差折光检测　器）、Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｐｌｕｓ　Ｃ１　８色谱柱（１　５０　ｍｍ×３．０　ｍｍ，　１．８　ｕｍ）　美国安捷伦公司；氨基柱（２５０　ｍｍ×　４．６　ｍｍ，５．０　ｋｔｍ）　美国Ｗａｔｅｒｓ公司；薄层层析板　（５　ｃｍ×２０　ｃｍ）　青岛海洋化工厂；玻璃层析柱　（１．０　ｃｍ×４０　ｃｍ）、ＨＬ．２型恒流泵　上海精科试业有　限公司。　１．３　方法　１．３．１　样品的制备　参考文献［５，９】，准确称取龙葵鲜果，按１：２５的料液　比（　／　）用ｐＨ　１．０，体积分数为６０％的乙醇室温浸提　３次，每次２　ｈ。合并滤液，真空旋转浓缩除去乙醇，过　Ｘ．５大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱以除去糖、氨基酸等物　质，用手持糖量计检测无可溶性固形物后再用ｐＨ　２．０，体　积分数为６０％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩后得　龙葵果花色苷精制物，冷藏备用。　１．３．２　展开剂的筛选　分别在１１种展开系统中进行薄层层析实验，选择适　合分离龙葵果花色苷的展开剂系统，展开剂系统的组成　见表１。　表１　不同展开荆的组成　Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｒｓ　展开剂名称　展开剂馏分体积比　ＢＡＷ，　Ｖ（正丁醇）：Ｖ（冰乙酸）：Ｖ（水）－－４：ｌ：１　ＢＡＷ　（正丁醇）：Ｖ（冰乙酸）：Ｖ（水）＝４：１：２　ＢＡＷ　Ｖ（正丁醇）：Ｖ（冰乙酸）：Ｖ（水）＝４：ｌ：３　Ｂ　Ｖ（正丁醇）：　（冰乙酸）：Ｖ（水）－－－４：ｌ：４（上层）　ＢＡＷ　（正丁醇）：　（冰乙酸）：　（水）－－４：ｌ：５（上层）　ＢＡＨ　Ｖ（正丁醇）：Ｖ（冰乙酸）：Ｖ（盐酸）＝１：４：５　ＢＨ　Ｖ（正丁醇）：Ｖ（盐酸（２ｍｏｌ／Ｌ））＝１：ｌ　ＥＡＷ　Ｖ（乙酸乙酯）：Ｖ（冰乙酸）：Ｖ（水）＝３：１：ｌ　ＭＷＡ　Ｖ（甲醇）：Ｖ（水）：Ｖ（冰乙酸）＝１１：５：１　ＢＥ　Ｖ（正丁醇）：Ｖ（乙酸乙酯）＝３：１　ＭＨ　（甲醇）：　（ＨＣ１）＝４：１　１－３－３　硅胶柱层析分离龙葵果花色苷　称取２５．０　ｇ硅胶湿法装柱，湿法上样后用薄层层析　选择的最佳展开剂进行洗脱，分别收集不同颜色的洗脱　液，利用薄层层析检验相同馏分并合并，４０℃条件下减　压旋转蒸发将溶剂旋出【】　。　１．３．４　高效液相色谱条件　将分离得到的馏分真空浓缩后用体积分数为０．１％冰　乙酸甲醇溶液溶解后，过０．４５“ｍ滤膜。参照Ｓｉｍｉｒｇｉｏｓｔｓ　等［】　的方法并做适当修改，得到色谱条件为：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　Ｐｌｕｓ　Ｃ１　Ｒ色谱柱（１５０　ｍｍ×３．０　ｍｍ，１．８　Ｉｘｍ）；　流动相Ａ：０．１％冰乙酸溶液，流动相Ｂ：甲醇；洗脱　流速为０．４　ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０℃，进样量５　ｕＬ。线性梯　度洗脱条件：０～３　ｍｉｎ，１０％～５０％Ｂ；３～５　ｍｉｎ，　５０％～８５％Ｂ：５～８　ｍｉｎ，８５％～１０％Ｂ；９～１２　ｍｉｎ，　１Ｏ％Ｂ等度洗脱。　１－３．５　质谱条件　参照Ｌｅｅ等¨　的方法并做适当修改，采用ＨＰＬＣ．　ＤＡＤ．ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ技术电喷雾电离离子源（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ，ＥＳＩ），雾化气压３５　ｐｓｉ；干燥气体氮气流速　１０．０　Ｌ／ｍｉｎ；干燥气体温度３００℃；毛细管电压４　０００　Ｖ；　碎裂电压１１０　Ｖ；碰撞能量５～４５　Ｖ；采用正离子模式，　在ｍ／ｚ　１ｏ０～１　０００范围内扫描。　１．３．６　花色苷的糖苷类型分析　将分离得到的花色苷馏分溶解于２　ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣ１中，　１００℃回流提取２　ｈ，得到棕色溶液后，用异戊醇萃取直　至水层无色【１　。异戊醇层为花色苷苷元，水层则为水解　得到的糖苷。将水解得到的糖苷浓缩后用乙腈溶解并过　０．４５　Ｉｘｍ滤膜。用配有示差折光检测器的Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０型　高效液相色谱仪分析。色谱条件为：Ｗａｔｅｒｓ氨基柱　（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５．０岫），柱温３５℃，流动相为乙　腈．水（７５：２５，１１／　），流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，进样量２０　Ｌ。　用质量浓度均为１Ｏ．０　ｍｇ／ｍＬ的Ｄ．葡萄糖、Ｄ．半乳糖、　Ｄ．果糖、三－鼠李糖、Ｄ．甘露糖、Ｄ．木糖和　．阿拉伯糖溶　液做标准品［１　。　５８　２０１６，Ｖｏ１．３７，Ｎｏ．０７　食品科孛　※基础研究　１．３．７　糖苷键位置的测定　取适量分离得到的花色苷馏分，以相应展开剂做　空白，用紫外分光光度仪于２００～７００　ａｍ进行光谱扫　描，测其最大吸收峰和在４４０　ａｍ波长处的吸光度，计算　』　＇－ｑ　－４４０ｎｍ—×１００。　２　结果与分析　２．１　展开剂的筛选结果与分析　实验选择常见花色苷的展开体系对龙葵果花色苷进　行分离，结果如表２所示。　表２　不同展开剂的展开效果　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｒｓ　展开剂　展开效果　出现１个红斑点，１个蓝斑点，１个黄色斑点拖尾严重　出现１个红斑点，１个蓝斑点，１个黄色斑点拖尾严重　出现１个红斑点，１个蓝斑点，１个黄色斑点清晰无拖尾　出现１个红斑点，１个蓝斑点，１个黄色斑点拖尾严重　出现１个红斑点，１个蓝斑点，１个黄色斑点拖尾严重　未分开　未分开　未分开　未分开　未分开　未分开　由表２可知，ＢＡＷ　（Ｖ（正丁醇）：Ｖ（冰乙酸）：　Ｖ（水）－＝４：１：３）为最优展开剂。用薄层色谱法分离龙葵　果花色苷时，用ＢＡＷ，展开出现３条色带，各色带在色谱　上的比移值（Ｒｆ）见表３。　表３　龙葵果花色苷薄层色谱分离的Ｉｔｆ值　Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｆｖａｌｕｅｓ　ｏｆＳｏｌａｎｕｍ　ｎｉｇｒｕｍ　Ｌ．ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　由表３可知，中间色带和下色带为主要花色苷，上色　带颜色很浅表现为黄色，经检验为非花色苷物质，因此　不做进一步研究。　２．２　最大吸收波长的确定　将硅胶柱层析分段洗脱得到的馏分薄层层析点样，合　并相同馏分后得到馏分Ｉ和馏分ＩＩ。对馏分Ｉ和馏分ＩＩ做紫　外全波长扫描。由图１、２可知，馏分Ｉ的最大吸收波长　在５４７　ｎｍ和３２１　ａｍ处，馏分ＩＩ的最大吸收波长在５２５　ａｍ　和３１５　ａｍ处。两个花色苷馏分均在３００￣３３０　ａｍ处有吸收　峰，说明花色苷分子内有酰基【１　。　删Ⅻ明　．　１．０　０．９　｝至ｊ姗　Ｏ．８　０．７　０．６　０．５　０．４　０．３　０．２　０．１　０．０　２０ｏ　２５０　３００　３５０　４００　４５０　５００　５５０　６００　６５０　７００　波长／ｎｍ　图１　馏分Ｉ紫外吸收光谱图　ｒａｇ．１　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｉ　３．０　２．７　２．４　２．１　１．８　ｉ　０．９　０．６　Ｏ－３　０．０　２０ｏ　２６０　３２０　３８０　４４０　５ｏ０　５６０　６２０　６８０　７４０　８ｏ０　波长／ｎｍ　图２　馏分１Ｉ鬃外吸收光谱圈　ｌａｇ．２　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｆｒａｃｔｉｏｎ　ＩＩ　２．３　ＨＰＬＣ．ＤＡＤ—ＥＳＩ．ＭＳ　ｖＩＳ检测结果与分析　馏分Ｉ经过ＨＰＬＣ．ＤＡＤ．ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ分析得到总离子　流图和质谱图。由图３可知，馏分Ｉ共有３个峰，峰１和峰２　经质谱分析为非花色苷类物质，峰３为花色苷类物质。　８０　蓍６０　４０　２０　０　＾～　＾一．＾　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１１　平衡时间／ｍｉｎ　图３　馏分Ｉ的总离子流图　Ｆｉｇ．３　Ｔｏｔａｌ　ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｉ　由图３可知，馏分１只有一个主要峰（峰３），出峰　时间为２．０９　ｍｉｎ，峰面积为３　６０７，峰面积归一化法计算得　出峰３占馏分Ｉ含量为９４％。由图４ａ可知，该物质的分子　离子峰［Ｍ＋Ｈ】＋的质荷比（ｍ／ｚ）为５３７，由图４ｂ可知其中　一个碎片离子的ｍ／ｚ为４３６，二者相差一个质荷比为１００的　基团，根据ｄａ　Ｓｉｌｖａ　研究该基团为琥珀酸。此外图１显　示馏分Ｉ在３２　１　ｎｍ处有一个尖峰，Ｅｓｃｒｉｂａｎｏ．Ｂａｉｌ６ｎ　研　究认为若花色苷分子有酰化基团，则在３００￣３３０　ａｍ处会　存在一个尖峰。另一个碎片离子［Ｍ＋Ｈ］十的　／ｚ为３０４对应　６种花色素中的飞燕草素，与碎片离子ｍ／ｚ　４３６相比又丢失　了一个ｍ／ｚ为１３２的基团，即为戊糖苷，由此推断该物质为　飞燕草素的衍生物，可能是飞燕草素．３．琥珀酰戊糖苷　。　※基础研究　良品科学　２ｏ１６，Ｖｏ１．３７，Ｎｏ．０７　５９　０　ａ　＾　一　×　器星　Ｖ　鼎　ｅ　暮　枢　』　ｊ葡景．．　Ｔ　ｌｏｏ　２ｏ０　３ｏｏ　４ＯＯ　５ｏｏ　６０ｏ　７ｏ０　８００　９００１　０００　ｍ／ｚ　卜　ｂ　’　ｉ　＾　×　∞　嘿　褪　…　季　．　１００　１５０　２００　２５０　３００　３５０　４００　４５０　５００　ｍ／ｚ　ａ．分子离子质谱图：ｂ．碎片离子质谱图。　图４　馏分Ｉ的质谱图　Ｆｉｇ．４　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｉｏｎ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｉ　１　１　３　▲．　～　ｉ　平衡时间／ａｒｉｎ　图５　馏分Ⅱ的总离子流图　Ｆｉｇ．５　Ｔｏｔａｌ　ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ＩＩ　馏分ＩＩ经ＨＰＬＣ．ＤＡＤ．ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ分析得到总离子　流图和质谱图。由图５可知，该馏分有３种物质，分别为　峰１、峰２、峰３，出峰时间分别为３．０５、３．９７、６．７８　ｍｉｎ。　其中峰１经紫外全波长扫描和二级质谱分析后显示为非花　色苷类物质，因此不做进一步的研究。　×　、／　氍　裰　１０ｏ　２００　３００　４Ｏ０　５００　６０ｏ　７００　８００　９００１　０００　ｍｌｚ　２＿３　２．２　０　＿ｎ　ｎ　荤　ｑ　量　０．０　５０　１ｏ０　１５０　２ｏｏ　２５０　３００　３５０　４００　４５０　ｍ／ｚ　鋈　５０　１０ｏ　１５０　２００　２５０　３００　３５０　４００　４５０　５０ｏ　ｍｌｚ　ａ．峰２分子离子质谱图；ｂ．峰２碎片离子质谱图；Ｃ．峰３碎片离子质谱图。　图６　馏分Ⅱ的质谱图　Ｆｉｇ．６　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｉｏｎ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｒｆａｃｔｉｏｎ　ＩＩ　由图５可知，峰２的出峰时间为３．９７　ｍｉｎ，峰面积归　一化法计算得出相对馏分ＩＩ含量为４５．６７％，由图６ａ可　知，该物质分子离子峰［Ｍ】　的ｍ／ｚ为４４９，图６ｂ显示其　碎片离子峰［Ｍｒ的ｍ／ｚ为２８７，二者相差１６２，为己糖　脱去一分子水所得，这是典型的矢车菊素．３一己糖苷的　质谱信息¨　。峰３的出峰时间为６．７８　ｍｉｎ，峰面积归一　化法计算得出相对馏分ＩＩ含量为１３．９７％，由图６ｃ可知，　此物质分子离子峰［Ｍ】　的ｍ／ｚ为４９２，碎片离子的ｍ／ｚ为　２８７，表明该物质为矢车菊素的衍生物，二者ｍ／ｚ相差２０５　为乙酰己糖脱去一分子水所得，因此推断该物质为矢车　菊素．３．乙酰己糖苷ｎ　，在３１５　ａｍ波长处检测的尖峰也证　实了酰基的存在　。　２．４　花色苷糖苷类型的分析　１７５　１５ｏ　震　蓁　２５　图７　馏分Ｉ糖苷（ａ）与阿拉伯糖（ｂ）的色谱图　Ｆｉｇ．７　ＨＰＬＣ－ＲＩＤ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｉ（ａ）ａｎｄ　ａｒａｂｉｎｏｓｅ（ｂ）　市售的花色苷标准品种类不全，此外花色苷的不稳　定性，导致购买标准品分析花色苷的组成可行性不大。　因此，经常采用将其酸水解后，分别分析花色苷的苷元　和糖苷的方法。由图７、８可知，馏分Ｉ中糖苷出峰时间　为５．０４１　ｍｉｎ，馏分ＩＩ中糖苷出峰时间为５．８２１　ｍｉｎ。标准　６０　２ｏ１６，ＶｏＬ３７，Ｎｏ．０７　宦晶科学　※基础研究　品的出峰时间分别为Ｄ．葡萄糖５．６４３　ｍｉｎ、Ｄ一半乳糖为　５．８５８　ｒａｉｎ、果糖５．２８８　ｍｉｎ、Ｌ．鼠李糖４．４４２　ｍｉｎ、Ｄ一甘露　糖５．４１６　ｍｉｎ、Ｄ　木糖４．８０６　ｍｉｎ、Ｌ．阿拉伯糖５．０８９　ｍｉｎ。　由此推测馏分Ｉ携带的糖苷为￡．阿拉伯糖，馏分ＩＩ所携　带糖苷为Ｄ．半乳糖。　２０００ｏ　０　餐－２０　０００　４０　０００　键６０　Ｏ０Ｏ　一８０　０００　０　１０　１５　２Ｏ　２５　３０　平衡时间／ｍｉｎ　２ｏｏ０ｏ０　警１５０　０００　１００　０００　５００００　Ｉｌ　Ｏ　Ｊ　Ｌ　————————、　０　５　１Ｏ　１５　２Ｏ　２５　３０　平衡时间／ｒａｉｎ　图８　馏分Ⅱ糖苷（ａ）与半乳糖（ｂ）的色谱图　Ｆｉｇ．８　ＨＰＬＣ－ＲＩＤ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ＩＩ（ａ）ａｎｄ　ｇａｌａｃｔｏｓｅ（ｂ）　２．５　花色苷糖苷键位置的确定　馏分Ｉ和馏分ＩＩ的　４　０　分别为１８．５％￣Ｅ１２５％，　证明糖苷键的位置在Ｃ３位［２…。该糖基可与有机酸发生酰　化反应，常见的芳香酸有ｐ．香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、　芥子酸、没食子酸或ｐ．羟基苯甲酸；脂肪酸有丙二酸、　醋酸、苹果酸、琥珀酸或草酸等。这些酸通常与Ｃ环３位　上糖基的６位羟基或者少数也与４位羟基发生酰化＿２”。因　此，推断馏分Ｉ为飞燕草素．３．琥珀酰阿拉伯糖苷，馏分　ＩＩ包含２种花色苷，分别为矢车菊素．３．半乳糖苷和矢车　菊素．３．乙酰半乳糖苷。　３　结论　花色苷作为替代化学合成的食品着色剂已经受到了社　会各界的高度关注，然而，花色苷在食品加工、运输和贮　藏过程中所表现出的极不稳定性限制了其在食品工业中的　应用。研究显示酰化的花色苷在ｐＨ值变化、温度升高和　光照存在时表现出了比非酰化的花色苷更好的稳定性　Ｊ。　因此，酰化的花色苷有着更加广泛的应用　】。酰化的花色　苷广泛存在于水萝卜、红薯、紫甘薯、红甘蓝和黑胡萝　卜中。Ｃｏｒｒｅａ．Ｂｅｔａｎｚｏ等【２　分析了野生蓝莓中的１２种花色　苷，结果仅有２种为酰化的花色苷。ｗｕ　Ｘｉａｎｇｙａｎｇ等　在　桑葚中分离得到４种花色苷，仅有１种为酰化的花色苷。　在草莓和红树莓中则不存在酰化的花色苷【２　２６］。而本实验　则找到了一种富含酰化花色苷的来源广泛价格低廉的植　物原料。　经硅胶柱层析分离得到２个花色苷馏分，通过ＨＰＬＣ—　ＤＡＤ．ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ分析，馏分Ｉ为单体花色苷，峰面积归　一化法计算得出纯度为９４％，推断为飞燕草素一３．琥珀酰　阿拉伯糖苷；馏分ＩＩ包含２种花色苷分别为矢车菊素．３一半　乳糖苷和矢车菊素．３．乙酰半乳糖苷，峰面积归一化法　计算二者总含量占馏分ＩＩ的５９．６４％。此分离方法简便易　行，为龙葵的精深加工提供了实验依据。　参考文献：　［１］　卞勇，吕冬霞．龙葵的室内栽培及利用［Ｊ］．生物学杂志，２００３，２０（４）：　４０－４３．ＤＯＩ：１０．３９６９８．ｉｓｓｎ．２０９５－１７３６．２００３．０４．Ｏ１５．　【２】　季宇彬，王胜惠，高世勇，等．龙葵活性成分的研究［Ｊ］．哈尔滨商　业大学学报（自然科学版），２００４，２Ｏ（６）：６３７·６４１．ＤＯＩ：１Ｏ．３９６９／　ｊ＿ｉｓｓｎ．１６７２－０９４６．２００４．０６．００１．　［３】　曹熙敏．微波辅助浸提法提取野生龙葵果红色素的工艺筛　选［Ｊ】．江苏农业科学，２０１１，３９（３）：３７８－３７９．ＤＯＩ：１０．３９６９／　ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１１．０３．１４９．　［４］　卢汝梅，谭新武，周嫒媛．龙葵的研宄进展［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，　２０（７）：１８２０－１８２２．ＤＯＩ：１０．３９６９８．ｉｓｓｎ．１００８—０８０５．２００９．０７．１３８．　［５］　腾飞，赵福杰，郑洪亮，等．龙葵果花色苷的提取工艺研究［Ｊ］．　食品工业科技，２０１４，３５（７）：２４０—２４５；２６７．ＤＯＩ：１０．Ｉ　３３８６／　ｊ．ｉｓｓｎｌＯ０２－０３０６．２０１４．０７．０１４．　［６］　张贺，王晖，袁博．提取龙葵果红色素影响因素的统计模型建　立［Ｊ］ｌ湖北农业科学，２０１３，５２（２２）：５５５３—５５５５．ＤＯＩ：１Ｏ．３９６９／　ｊ．ｉｓｓｎ．０４３９—８１１４．２０１３．２２．０４７．　［７］　范翠丽，李向东，曹熙敏，等．野生龙葵果红色素最佳提取工艺筛　选［Ｊ］　广东农业科学，２０１１（４）：１０３－１０４．ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００４—　８７４Ｘ．２０１１．０４．０４０．　［８］　木合塔尔·吐尔，洪木尼热·阿不都克力木．戈壁野生龙葵果紫红色　素的提取及其理化性质研究［Ｊ］．陕西师范大学学报（自然科学版），　２００４，３２（４）：１２０—１２１．ＤＯＩ：１０．３３２１８．ｉｓｓｎ：１６７２·４２９１．２００４．０４．０３１．　［９】　腾飞，郑洪亮，王萍．龙葵果花色苷纯化工艺［Ｊ］．食品与发酵工业，　２０１４，４０（４）：９５—１００．ＤＯＩ：１０．１３９９５￣．ｃｎｋｉ．１１－１８０２／ｔｓ．２０１４．０４．０１９．　［１０］　腾飞，刘召君，郑洪亮，等．龙葵果花色苷降解动力学［Ｊ］．食品与生　物技术学报，２０１４，３３（５）：５４８—５５９．　ＳＩＭＩＲＧＩＯＴＩＳ　Ｍ　Ｊ，ＳＩＬＶＡ　Ｍ，ＢＥＣＥＲＲＡ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ　ｃｈａｍｃｔｅｒｉｓａｆｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｆｏｕｒ　Ｍａｐｕｃｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔｓ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　ｄｉｏｄｅ　ａｒｒａｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＬＣ—　ＤＡＤ）ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ　ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　（ＨＰＬＣ－ＥＳＩ—ＭＳ）［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，１３１（１）：３１　８－３２７．　ＤＯＩ：１０．１０１６８．ｆｏｏｄｃｈｅｍ．２０１１．０７．１１８．　［１２１　ＬＥＥ　ＪＨ，ＬＩＭ　ＪＤ，ＣＨＯＵＮＧＭＧ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎｔｈｅ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐｒｏｆｉｌｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ　ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ　ｆＳｉｂｅｒｉａｎ　Ｇｉｎｓｅｎｇ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｏｄｓ，２０１３，５（１）：３８０—３８８．　ＤＯＩ：１０．１０１６＠ｊｆ．２０１２．１１．０１０．　［１３］　张琳琳．黑加仑色素分离、结构初步鉴定及稳定性研究［Ｄ】．哈尔　滨：东北农业大学，２００８：２８．　［１４］　ＨＵＡＮＧ　Ｘｉｎｔｉｎｇ，ＬＩＵ　Ｊｉａｎｑｉｕ，ＰＥＮＧ　Ｑｉ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｐｉｇｍｅｎｔ　ｏｆＡｄｉｎａｎｄｒａ　ｍｉｌｌｅｔｔｉｉ　ｉｆａｆｉｔ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌｎａｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００７，１６（１）：３１－３４．　※基础研究　食品科学　２ｏ１６，ＶｏＬ３７，Ｎｏ．０７　６１　［１５】　ＥＳＣＲＩＢＡＮＯ．ＢＡＩＬ０Ｎ　Ｍ　Ｔ，ＳＡＮＴＯＳ．ＢＵＥＬＧＡ　Ｃ，ＲＩＶＡＳ—　ＧＯＮＺＡＬＯ　Ｊ　Ｃ．Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｉｎ　ｃｅｒｅａ１ｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，２００４，ｌ０５４（１／２）：１２９－１４１．ＤＯＩ：１Ｏ．１Ｏ１６／　ｊ．ｃｈｒｏｍａ．２００４．０８．１５２．　［１６】　ｄａ　ｓＩＬ、　Ｆ　Ｌ，ＥＳＣＲＩＢＡＮＯ．ＢＡＩＬＯＮ　Ｍ　Ｌ　ＡＬＯＮｓＯ　Ｊ　Ｊ　Ｐ．ｅｔ　ａｌ＿　Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｐｉｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ［Ｊ］．ＬＷＴ－Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，４０（２）：３７４－３８２．ＤＯＩ：１０．１０１６￣．１ｗｔ．２００５．０９．０１８．　【１７】　ＣＵＩ　Ｃｈｕｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈａｏｍｉｎ，ＹＯＵ　Ｌｉｊ￣ｎ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｖｙ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｒｆｏｍ　Ｒｈｏｄｏｍｙｒｔｕａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ａｉｔ．、ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ［￣．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３，１３９（１／２／３／４）：１－８．　ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｆｏｏｄｃｈｅｍ．２０１３．０１．１０７．　【１８】　ＹＡＮＧ　Ｚｈｅｎｄｏｎｇ．ＺＨＡＩ　Ｗｅｉｗｅｉ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｗａｖｅ．　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｐｕｒｐｌｅ　ｃｏｒｎ（Ｚｅａ　ｍａｙｓ　Ｌ．）　ｃｏｂ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ＨＰＬＣ—ＭＳ［Ｊ．ＩｎｎｏｖａｔＪ］ｉｖｅ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｍｅｒｇｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２０１０，１１（３）：４７０—４７６．ＤＯＩ：１０．１０１６／　ｊ．ｉｆ￣ｔ．２０１０．０３．００３．　［１９】　ＲＥＢＥＬＬＯ　Ｌ　Ｐ　Ｇ，ＬＡＧＯ·ＶＡＮＺＥＬＡ　Ｅ　Ｓ，ＢＡＲＣＩＡ　Ｍ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ＿　Ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｅｒｒｙ　ｐａｒｔ８　ｏｆ　ｈｙｂｒｉｄ　ｇｒａｐｅ　ｃｕｌｔｉｖａｒ　ＢＲＳ　Ｖｉｏｌｅｔａ（ＢＲＳ　ＲｕｂｅａＸ　ＩＡＣ　ｌ３９８—２ｌ、ｕｓｉｎｇ　ＨＰＬＣ—ＤＡＤ．ＥＳＩ．　ＭＳ／ＭＳ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１３，５４（１）：３５４—３６６．　Ｄ０Ｉ：１０．１０１６￣．ｆｏｏｄｒｅｓ．２０１３．０７．０２４．　【２０】　李永强．白刺果实色素结构及性质的研究［Ｄ］．泰安：山东农业大学，　２００４：４７．　［２１】　ＧＩＵＳＴＩ　Ｍ　Ｍ．ＷＲＯＬＳＴＡＤ　Ｒ　Ｅ．Ａｃｙｌａｔｅｄ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｅｄｉｂｌｅ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００３，ｌ４（３）：２１７－２２５．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ１３６９－　７０３Ｘ（０２）００２２１．８．　［２２】　ＪＩＮＧ　Ｐｕ，ＺＨＡＯ　Ｓｈｕｊｕａｎ，ＲＵＡＮ　Ｓｉｙｕ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅ　ＯＣＣ￣－＇ＴＣｎＣＣＳ　ｉｎ　ｈｔｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　ｒｅｄ　ｒａｄｉｓｈ（Ｒａｐｈａｎｕｓ　ｓａｆｉｖｕｓ　Ｌ．）’ａｎｄ　ｈｔｅｉｒ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｈｅａｔ　ｎａｄ　ｐＨ叨．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，　１３３（４）：１５６９—１５７６．ＤＯＩ：１０．１０１６￣．ｆｏｏｄｃｈｅｍ．２０１２．０２．０５１．　［２３］　ＣＯＲＲＥＡ－ＢＥＴＡＮＺＯ　Ｊ，ＡＬＬＥＮ－ＶＥＲＣＯＥ　Ｅ，ＭＣＤＯＮＡＬＤ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ　ａｎｇｕｓｔ￣ｆｏｌｉｕｍ）ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｓｉｍｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，１６５：５２２—５３１．ＤＯＩ：１０．１０１６／　ｊ．ｆｏｏｄｅｈｅｍ．２０１４．０５．１３５．　［２４】　ＷＵ　Ｘｉｎａｇｙａｎｇ，ＬＩＡＮＧ　Ｌｉｎｇｈｏｎｇ，ＺＯＵ　Ｙｅ，ｅｔ　ａ１．Ａｑｕｅｏｕｓ　ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｆｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｒｆｏｍ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ（Ｍｏｒｕｓ　ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａ　Ｒｏｘｂ．）［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２０１１，　１２９（２）：４４３－４５３．ＤＯＩ：１０．１０１６￣．ｆｏｏｄｃｈｅｍ．２０１１．０４．０９７．　ＧｏＮＺＡＩ　ＥＺ．Ｇ６　ｚ　Ｄ，ＬＯＺＡＮＯ　Ｍ，ＦＥＲＮ￣ｕＮＤＥＺ－ＬＥ６Ｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ　ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ：ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ　ＨＰＬＣ—－ＤＡＤ／ＥＳＩ－－ＭＳ　ｉｎ　ｓｉｘ　ｓｗｅｅｔ··ｃｈｅｒｒｙ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｇｒｏｗｎ　ｉｎ　Ｖａｌｌｅ　ｄｅｌ　Ｊｅｒｔｅ（Ｓｐａｉｎ）【Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ，２０１０，　２３（６）：５３３－５３９．ＤＯＩ：１０．１０１６￣．ｊｆｅａ．２００９．０２．００８．　ＣＨＥＮ　Ｆａｎｇ，ＳＵＮ　Ｙａｎｇｚｈａｏ，ＺＨＡＯ　Ｇｕａｎｇｈｕａ，ｅｔ　ａ１．Ｏｐｔｉｉｍｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｌｒｔａｓｏｕｎｄ—ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｉｎ　ｒｅｄ　ｒａｓｐｂｅｒｒｉｅｓ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｕｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ　Ｓｏｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２００７，１４（６）：７６７—７７８．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｕｌｔｓｏｎｃｈ．２００６．１２．０１１．