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结合转移实验步骤：
准备试剂：(1)TES缓冲液：0.05M PH8.0
(2)2X孢子预萌发培养基：酵母膏，1%；酪蛋白氨基酸，1%；CaCl2,0.01M
(3)接合转移用培养基：100mL
可溶性淀粉：1% ；胰蛋白胨：0.2% ；NaCl:0.1%
(NH4 )2SO4 ：0.2% K2 HPO4，0.1%；CaCO3，0.2%
无机盐溶液*：1 ml (FeSO4 .7H2O，0.1g； MgCl.6 H2 O，0.1g；
ZnSO4. 7H2 O，0.1g)
琼脂2%
PH7.2
1.带有oriT的目的质粒PIB转化进入大肠杆菌ET12567( pUZ8002),得到转化子;
2. 将转化子的过夜培养物转接到50mL含50ug的安普、卡那和氯霉素的LB中， 37
oC，200r/min
培养转化子,到合适浓度(OD600:0.4-0.6)收集菌体;
3. 用等体积新鲜的LB洗涤菌体两次(洗掉抗生素), 0.1倍体积的LB悬浮，备用;
4. 链霉菌孢子的热激和预萌发
(1)制备浓的孢子悬液
(2)新鲜孢子悬浮于5ml 0.05M PH8.0 的TES;
(3)50ºC水浴热激10分钟;
(4)冷却到室温后加入等体积（5Ml）2X孢子预萌发培养基;
(5)37ºC摇床分别培养2-３小时;
（6）离心收集孢子并重新悬浮于适量的水或TES中;
（7）在振荡器上打散孢子
5. 按(1*e-8)：(1*e-9)与3中的大肠杆菌混匀
6. 30ºC培养13-20小时左右用适当浓度的抗生素和萘啶酮酸（抑制大肠杆菌）覆盖
7. 30ºC培养数天（一般2天）可得到接合转移子.
8. 挑选接合转移子到含适当抗生素和萘啶酮酸的平板上, 验证;
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