检验医学与临床２０１３年８月第１Ｏ卷第１５期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１３，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．１５ ・综 述・ 免疫学检测在结核病诊断中的应用 刘 冰综述，陈华根审校（四川省成都市新都区人民医院 ６１０５００） 【关键词】 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１３．１５．０６１ 文献标志码：Ａ文章编号：１６７２—９４５５（２０１３）１５—２０２７—０２ 结核病是由结核分支杆菌所致的一种古老传染病，它的传 高，敏感性低，结合３８ ＫＤ蛋白，可以提高菌阴结核病检测敏 播与有记载的人类文明史同步。全球有１／３的人感染结核分 枝杆菌，有２ ０００万活动性结核病患者，每年新发病例９００万 人，有３００万人死于结核病。中国是结核分枝杆菌高感染率国 家，仅次于印度，居世界第二，感染率４４．５ ，有活动性肺结核 患者４５１万，每年有１２．７万人死于结核病。由于其治疗费用 高、治愈率低、病死率高，世界卫生组织已将结核病、艾滋病和 疟疾一起列为人类最主要杀手。结核病不仅损害个人健康，影 响生命质量，而且还会对患者家庭造成沉重的精神与经济压 力，从而加重社会负担，现已成为全球性公共卫生问题［１］。结 核病的实验室诊断，对于结核病的预防和治疗具有重要作用。 涂片染色镜检和培养技术是迄今应用最为广泛、经典的结核病 诊断技术＿２］，但存在敏感性低、检测周期长、对肺外结核和越发 增多的菌阴肺结核检测局限等特点。分子生物学技术是新兴 的结核病实验室诊断技术，具有快速、灵敏、特异等特点，特别 是菌种鉴定和耐药基因突变检测，被认为是实验室诊断的“金 标准”，必将成为结核分枝杆菌检测的常规方法，但存在设备和 技术要求高，许多具体方法效能还有待临床大样本验证［３ 的缺 点。免疫学检测技术也是实验室诊断结核病广泛应用的技术， 从早期的结核菌素试验，到现在的蛋白印迹和蛋白芯片技术， 有适合基层实验室使用的酶联免疫吸附试验、免疫渗滤和层析 技术，也有适合各级实验室使用的蛋白印迹试验、酶联免疫斑 点技术（ＥＬＩＳＰＯＴ），各种免疫学检测技术正逐步在实验室开 展。免疫学检测的关键是制备选择特异的免疫原。 １常用免疫原 １．１ 旧结核菌素（０Ｔ）和纯蛋白衍生物（ＰＰＤ） ０Ｔ是结核分 枝杆菌在甘油肉汤中培养后，经加热、过滤和浓缩处理而获得 的复合抗原；ＰＰＤ是在用三氯醋酸沉淀培养滤液后的纯化物。 牛分枝杆菌经１３年２３０代传代培养后获得的减毒活疫苗一卡 介苗（ＢＣＧ）含ＯＴ和ＰＰＤ抗原。现在常用ＰＰＤ作皮肤试验， 以此选择接种对象和判定接种效果、诊断婴幼儿结核病、未接 种对象结核分枝杆菌感染流行病学调查、测定肿瘤患者的细胞 免疫功能，也可用ＰＰＤ检测结核分枝杆菌抗体。缺点是多种 分枝杆菌皆含ＰＰＤ，敏感性和特异性较低，难以区分显性感染 还是阴性感染、肺内外感染以及ＢＣＧ免疫。 １．２早期分泌性靶抗原６（ＥＳＡＴ一６） 从结核分枝杆菌培养 滤液中纯化分离的低分子蛋白，相对分子质量为６×１０。，含９５ 个氨基酸。免疫原性较强，是参与结核病免疫调节的重要抗 原。对结核分枝杆菌呈现免疫应答，对非结核分枝杆菌多无免 疫应答，因此可作为免疫检测重要抗原和新型疫苗备选抗原， 用作结核菌实验室检测和结核病防治 ］。 １．３ ＣＦＰ１０同ＥＳＡＴ－６属同一家族，分离于结核分枝杆菌 培养滤液，作用于Ｔ细胞，诱导皮肤迟发性超敏反应，刺激单 核细胞产生特异性干扰素７。作为免疫学检测抗原，特异性 感性 。 １．４ ３８ＫＤ蛋白（Ａｇ５，Ｐｓｔ一１，Ｐａｂ） １９８６年由Ｙｏｕｎｇ等［６ 首 次制备，含特异的Ｔ淋巴细胞和Ｂ淋巴细胞抗原决定簇，是结 核杆菌的主要免疫原，对结核病的诊断具有较高的特异性和敏 感性，可区分结核病患者和ＢＣＧ接种后阳性者。 １．５ Ａｇ８５复合体 是一组具有较强免疫活性的分枝杆菌分 泌性蛋白，至少包括Ａｇ８５Ａ、Ａｇ８５Ｂ、Ａｇ８５Ｃ ３种蛋白成分，可 在所有的分枝杆菌菌株中引起广泛的交叉反应。Ａｇ８５Ｂ（抗原 ６、ＭＰＢ／ＭＰＴ５９）是结核杆菌的主要分泌蛋白，诊断上优于 Ａｇ８５Ａ和Ａｇ８５Ｃ。Ａｇ８５的增高，对活动性结核病判定具有辅 助诊断价值［７］。 １．６ ＭＰＴ６４是一种２４ＫＤ的结核分枝杆菌分泌蛋白，只存 在于结核分枝杆菌复合群中，大多数ＢｃＧ菌株对ＭＰＴ６４皮 肤试验不反应，作为皮肤试验诊断蛋白优于ＰＰＤ＿日］。 １．７ Ａ６０抗原 是一种脂一多糖一蛋白复合物，ＯＴ和ＰＰＤ的 主要成分，具有强免疫原性，激发特异性免疫应答和迟发性超 敏反应，对肺外结核诊断具有一定价值。 １．８ １４ＫＤ蛋白 含结核杆菌特异性的Ｂ抗原表位，诱导特 异性体液免疫应答，感染早期特异性抗体升高。 １．９ ＴＢ４ 是结核分枝杆菌强毒株Ｈ３７ＲＶ多肽，只与少数分 枝杆菌有交叉免疫反应，作为结核菌感染诊断有较高的灵敏度 和特异性。 １．１０ ＬＡＭ 即脂阿拉伯甘露聚糖抗原，是分枝杆菌特有的 细胞壁成分，正生长的结核菌能大量产生，可能是Ａ６０抗原的 重要成分。对判定活动性结核、菌阴结核和其他肺外结核有诊 断意义¨ｇ。 。 虽然各种结核分枝杆菌免疫原不断发现，但没有任何一种 抗原能检测结核病患者血清中所有结核抗体，且在分枝杆菌中 存在不同程度的交叉反应性＿１ 。利用多个相关抗原联合检 测，可以提高免疫学检测的敏感性和特异性，满足结核病诊断 的各种需求。朱中元等＿１ 报道，以３８ＫＤ、蛋白１６和ＬＡＭ，利 用蛋白芯片进行临床实验，取得较理想的快速诊断效果。杜凤 娇等口 报道，用ＥＳＡＴ－６和ＣＦＰ一１０融合蛋白刺激，利用 ＥＬ１ＳＰＯＴ和流式细胞术检测干扰素７，对结核性胸膜炎的诊 断有较高的敏感度和特异度。刘忠华等『１ 报道，ＣＦＰ－１０、 ＭＰＴ４８和ＴＢ８．４融合蛋白具有很好的免疫原性，可以提高结 核抗体检测的特异度和敏感度。因此，利用多个纯化的特异抗 原，联合检测，可显著提高检测的敏感性，是结核病免疫检测今 后研究和应用的方向。 ２主要免疫学检测技术 ２．１酶联免疫吸附试验利用包被在微孔上的已知抗原（抗 体）和待测抗体（抗原）及酶标记抗原（抗体）反应，洗涤去多余 的反应物，催化底物显色，根据呈色强弱判定待测物有无（多 ・２０２８・ 检验医学与临床２０１３年８月第１０卷第１５期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１３，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．１５ 少）。通常检测步骤包括：加样、温育、洗涤、显色、比色、结果判 ｃｕｌｏｓｉｓ ＣＦＰ １ ０，ａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｍｉｓｓｉｎｇ ｉｎ 断和报告。该检测技术检测结核抗体具有快速、简便、准确、价 廉的特点，临床应用广泛。 ２．２金标免疫渗滤法和金标免疫层析法 均属固相膜免疫测 定，不同的是前者液体在纤维素膜上是直向穿流，后者是 横流。无需特殊仪器，易于判读，简便快速、试剂稳定，临床应 用广泛。 ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ ＢＣＧ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，３８ （９）：３２８５—３２９０． ［６］Ｙｏｕｎｇ Ｄ，Ｋｅｎｔ Ｌ，Ｒｅｅｓ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｏｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ３８ ｋｉｌｏ ｄａｌｔｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕ— ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９８６，５４（１）：１７７ １８３． ［７］Ｌｉｍ ＪＨ，Ｐａｒｋ ＪＫ，Ｊｏ ＥＫ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏ— ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ３０／３２一ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ ２．３免疫印迹技术是电泳技术与酶联免疫吸附测定技术结 合的产物，常用作抗体确认试验。对活动性结核病，尤其是菌 阴肺结核的诊断具有很高的价值。但该方法繁琐，成本较高， 常规检测应用较少。 ２．４蛋白芯片技术将多种结核分枝杆菌特异抗原联合，借 助微阵列高通量平台，检测结核特异性抗体。具有操作简便快 速、敏感性高、特异性强等优点，但芯片制作工艺需完善，需要 仪器判读，临床推广还需时日。 ２．５ ＥＬＩＳＰＴ是近年来应用在结核病免疫检测的新兴技术， 具有较高的灵敏度和特异性，但操作繁琐，推广困难。 参考文献 ａｎｔｉｇｅｎ ８５ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎ— ｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９９９，６７（１１）：６１８７～６１９Ｏ． Ｅ８］Ｓｒｅｎｓｅｎ ＡＬ，Ｎａｇａｉ Ｓ，Ｈｏｕｅｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ— ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｏｗ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｍａｓｓ Ｔ—ｃｅ１１ ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ｍｙｃｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９９５，６３（５）： １７１０—１７１７． ［９］ Ｓａｄａ Ｅ，Ｂｒｅｎｎａｎ ＰＪ，Ｈｅｒｒｅｒａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉ～ ｐｏａｒａｂｉｎｏｍａｎｎａｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕ～ ｌｏｓｉｓ［－Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９０，２８（１２）：２５８７—２５９０． ［１Ｏ］Ｈｕｎｔｅｒ ＳＷ，Ｇａｙｌｏｒｄ Ｈ，Ｂｒｅｎｎａｎ ＰＪ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｎｔｉ～ ｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ［１］端木宏谨，龚幼龙，武桂英，等．浙江和广东两省耐药和药 物敏感性肺结核患者疾病负担研究［Ｊ］．中华结核和呼吸 杂志，２００５，２８（６）：４０７～４１０． ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅｐｒｏｓｙ ａｎｄ ｔｕｂｅｒｃｌｅ ｂａｃｉｌｌｉ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， １９８６，２６１（２６）：１２３４５—１２３５１． ［１１］马坞，朱莉贞，潘毓萱．结核病［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社，２００６：６５—６８． ［２］唐神结，高文．临床结核病学［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社，２０１１：３９—４４． ［１２］朱中元，王海波，刘爱国，等．抗结核分枝杆菌多种抗原的 ｒ３］Ｂａｏ ＪＲ，Ｍａｓｔｅｒ ＲＮ，Ｓｃｈｗａｂ ＤＡ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ 抗体检测蛋白芯片研究ＦＪ］．中国热带医学，２００４，４（６）： ９０７—９１０． ａｃｉｄ—ｆａｓｔ ｂａｃｉｌｌｉ ｕｓｉｎｇ ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ Ｅ Ｊ］．Ｄｉａｇｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２０１０，６７（３）：２３４—２３８． ［１３］杜风娇，戈启萍，韦攀健，等．酶联免疫斑点术和流式细胞 术检测 干扰素对结核性胸膜炎的辅助诊断价值［Ｊ］结 核病与胸部肿瘤，２０１１，３４（３）：６１７－６２２． ［１４］刘忠华，杨华，秦莲花，等．结核分枝杆菌ＣＦＰ一１０和 ＭＰＴ４８及ＴＢ８．４融合蛋白的表达与临床应用［Ｊ］．中华 检验医学杂志，２０１２，３５（４）：３４５—３４８． （收稿日期：２０１３一Ｏ１—２８修回日期：２０１３ ０３ １８） ［４］Ｋｒａｕｓ ＡＢ，Ｓｈａｆｆｅｒ Ｊ，Ｔｏｈ ＨＣ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｈｏｓｔ ＣＤ８ Ｔ—ｃｅｌｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ ａｎｔｉ－ｄｏｎｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—。２—。ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｒｒｏｗ ｇｒａｆｔ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｎｏｎｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ，２００３，３１（７）： ６０９—６２１． Ｅｓ］Ｄｉｌｌｏｎ ＤＣ，Ａｌｄｅｒｓｏｎ ＭＲ，Ｄａｙ ＣＨ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒ— 人工髋关节及膝关节置换术后患者康复治疗现状 田治标综述，俞益火审校（重庆市梁平县人民医院骨一科【关键词】全髋关节置换术； 膝关节置换术； 康复治疗 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１３．１５．０６２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—９４５５（２０１３）１５－２０２８—０２ 现在，越来越多的患者开始采用全髋关节置换（ＴＨＡ）、全 １．１手术后的出院时间不宜过早 有学者认为，接受ＴＨＡ、 ４０５２００） 膝关节置换（ＴＫＡ）术来治疗髋、膝关节方面的疾病，这就要求 人工ＴＨＡ、ＴＫＡ术后的患者康复治疗也要不断发展，满足患 者的康复需求口］。本文首先对近年来国内外与ＴＨＡ、ＴＫＡ术 后患者的康复治疗相关的文献进行了总结，之后对ＴＨＡ、 ＴＫＡ术后的临床现状和其未来的展望进行了综述。 １ 国内外关于ＴＨＡ、ＴＫＡ术的文献报道综述 ＴＫＡ术的患者不宜过早地出院ｌ＿３］。经过相关学者的研究表 明，在９８例接受ＴＫＡ术的患者当中，３５ 左右的患者都是被 医院住院天数而被迫提前出院 ］。但是，这些患者的身体 机能还没有得到完全的恢复，加上提前出院，患者的治疗效果 会减弱许多＿５］。因此，部分学者建议接受ＴＫＡ术的患者不宜 过早的出院，而要等到各项指标完全恢复正常以后才能出院。 １．２人工ＴＨＡ、ＴＫＡ术时机选择要恰当 经过有关学者研 究表明，许多骨关节炎的患者在接受ＴＫＡ手术之前通常要排 人工ＴＨＡ、ＴＫＡ术后，影响患者康复治疗效果的因素有 很多，包括术前患者的病情、手术的效果以及手术的类型等因 素＿２］。为了进一步提高患者术后的康复疗效，国内外许多学者 对此进行了研究，并提出了较新的观点。 很长的队等候 ］。学者把适于接受ＴＫＡ手术而且等待时间 已经超过６个月的患者与等待时间在６个月以内的需要接受
