利用腹腔镜微创手术回收肉羊体内胚胎技术研究

doi:10.19369/=. cnki. 2095 — 9737.2019.02.009

现代畜牧科技 2019年第2期总第50期

利用腹腔镜微创手术

回收肉羊体内胚胎技术研究

李信涛1，刘学峰2，佟桂芝2，潘志忠3，王伟霞1，刘晓辉1，刘海燕1，谭成成1，张鹏举1，梁艳华4，郭立民5

吉林省农业科学研究院，吉林长春；2.黑龙江省畜牧研究所，黑龙江齐齐哈尔；

3. 松原职业技术学院，吉林松原；4. 松原市农业科学院，吉林松原；5.黑龙江省畜牧总站，黑龙江哈尔滨）

摘要：针对我国肉羊良种化和繁殖技术水平低的现状，采用现代繁殖生物技术是提高优质肉用 种羊利用率、缩短生产周期、加速良种肉羊扩繁、促进肉羊产业化发展的必经之路。把肉羊胚胎 移植过程中的传统手术回收体内胚胎技术进行了创新，微创手术回收体内胚胎技术并与传统方 法胚胎回收效果进行对比分析，提高了良种供体母羊的利用率，降低了胚胎移植技术的成本，突 破了肉羊胚胎移植成功率低的技术瓶颈，促进了肉羊胚胎移植产业化。关键词：肉羊；腹腔镜；采集胚胎；胚胎回收率中图分类号：S826.3

文献标识码：A

文章编号：2095 — 9737(2019)02 — 0014 — 02不同冲卵方法对供体羊胚胎生产效率的影响。通 过对不同冲卵方法（传统手术方法和腹腔镜下微 创法）的比较分析为提高杜泊羊母羊的胚胎生产 效率提供试验依据和经验，同时也为提高企业胚 胎移植规模化生产效率及实践指导。1.2药品

注射用血促性素（孕马血清，PMSG)购自宁波 第二激素厂；氯前列烯醇购自上海市计划生育科 学研究所；阴道海绵栓、胚胎保存液、〇 — FSH超 数排卵药、冲胚液全部为新西兰进口。1. 3

器械

主要器械有外科手术器械、手术保定架、体视 显微镜、腹腔镜、冲卵管、检卵针、移植管等。

供体羊

选取2\"3岁繁殖性能正常的经产纯种杜泊 羊母羊作为供体羊，统一饲养管理，并使用相同的 超数排卵和腹腔镜输精方案，系统地比较不同的 手术冲胚次数(供体重复冲胚经历的手术次数）及

收稿日期2019 — 01 —15

基金项目：吉林省松原市科技创新卷项目（N201708)

第一作者简介：李信涛\"969 —），男，黑龙江杜蒙人，硕士，副研究员，研究方向：动物遗传育种与繁殖。

胚胎移植就是将良种母羊生产的早期胚胎取 出，移植到另一只生理状态相同的本地普通受体 母羊体内，使之继续发育成新的个体，即“借腹怀 胎”。为使肉羊胚胎移植技术产业化，研究提高良 种供体羊的使用效率；即腹腔内窥镜采集胚胎技 术，获得适于肉羊胚胎移植技术产业化操作的更 为简化、稳定的程序，降低各种变化因素对胚胎移 植效率的影响。利用腹腔镜对肉羊供体母羊实施 微创手术，借助自制的冲胚针和回卵管，对供体母 羊进行非开放性腹腔内冲胚，从而有效回收肉羊 体内胚胎技术。

1材料

1.1

2方法

2.1供体羊超数排卵处理

在放置阴道海绵栓的第12天开始对供体羊

现代畜牧科技 2019年第2期总第50期

进行超数排卵处理。超数排卵处理采用递减法连 续肌肉注射超数排卵药物0—FSH4天，每天上、 下午肌肉注射各1次，总剂量为10mL。超数排 卵处理的第4天，即放置阴道海绵栓的第15天取 出阴道海绵栓，同时用加双抗（8X105IU青霉素P 1X106 IU链霉素）的生理盐水冲洗供体羊的 阴道。

2:供体羊试情、配种

取栓的第2天对供体羊进行试情，对发情母 羊于发情当天进行腹腔镜输精。2: 冲胚

以开始配种日为第0天，于配种后的第6天 或第7天通过手术法子宫角冲出胚胎。冲胚液和 短期保存液均为加拿大进口产品，手术前置于 38D的水浴中预热。在一侧子宫角基部用钝钳刺 透子宫壁，然后将8 #〜10 #冲卵管从此孔导人 子宫角大弯处，给冲卵管气囊充气（充气量2\" 5mL),拔出冲卵管内芯，用20mL注射器与针头 连接，并由此向子宫腔内注人冲卵液。注人冲卵 液的方法为：先注人冲卵液20〜25mL，对超排反 应好的供体可再重复冲1次，然后注人空气5\" 10mL,此方法可保证胚胎的有效回收。用％9cm 培养皿接收冲卵液。最后用手指轻轻压挤子宫 角，让冲卵液尽量回收完全，然后气囊放气，用同 样的方法冲另一侧子宫角。每侧子宫角约需 40mL冲卵液。

冲胚完毕后，用25\"30D的生理盐水将子宫 及卵巢冲洗干净，然后送回腹腔，将子宫复位，并 向腹腔倒人250 mL消毒液。分别对腹膜、肌肉和 皮肤进行缝合。供体母羊创口采用两层缝合法。 即腹膜与肌肉进行缝合，皮肤进行结节缝合。针 脚间距1cm。在肌肉与皮肤间撒适量青霉素粉， 以防创口感染。术后注射青霉素80万IU，链霉素 100万IU。腹腔镜微创术回收肉羊体内胚胎技术 利用腹腔镜对肉羊供体母羊实施微创手术，借助 自制的冲胚针和回卵管，对供体母羊进行非开放 性腹腔内冲胚，从而有效回收肉羊体内胚胎技术。 腹腔镜

术回收肉羊体 胚 技术

腹腔镜

肉羊 体 羊 施

手术&借助 制的冲胚

针和回卵管，对供体母羊进行非开放性腹腔内冲 胚，从而有效回收肉羊体内胚胎技术。2:数据分析

试验数据采用SPSS19.0统计软件进行统计 分析和显著性检验。

• 15 +

3结果与分析

3.1供体羊手术冲胚次数对胚胎生产效率的影响

体羊的手术冲胚

于胚 生产有明显的影响。前3次手术冲胚及腹腔镜法收集 胚 & 体羊 的 冲胚 胚无显著差异（P<0.05#供体羊第4、5次手术冲 胚& 体羊

的

冲胚

胚 显

著(P<0.05)低于其他组;供体羊第4、次腹腔镜 法收集胚胎，供体羊所获的平均冲胚数和平均可 用胚数无显著差异（P<0.05)(见表1)。

表1不同冲卵方法对供体胚胎生产效率的影响冲胚方法冲胚，粉冲胚

冲胚*胚(枚/头•次）

()常

14:9a4:0a规24:5a4:5a手34:5a4:2a术44.46b4:0b法5

3:0c2:9c合计4:8a4：1a腹15.52A4:8a腔25.A4:8a镜35:43A4:9a法45:43A4:5a5

5:41A4:2a合

5:44A

4:8a

注：同一列数据相比，字母不同表示具有显著性差异 (!<0.05)。

4讨论与结论

对优良种母畜进行重复超数排卵，是充分挖 掘良种母畜的遗传潜力和向肉羊产业提供大量优 质胚胎的重要手段[1]。该研究对杜泊羊母羊进行 复超 排 处

手术冲胚及腹腔镜下采

卵，结果表明，第5次手术冲胚处理的杜泊羊母羊 所获的平均回胚胎数和平均可用胚数显著低于其 他组！< 0.05)，这与Ptak等)2]报道的羊卵巢卵 泡的反应能力随超数排卵重复次数增加而下降相 一致。通常，供体羊经过手术冲胚后，会发生一定 比例的手术粘连，而粘连不但影响羊的生理状况， 还会对供体的排卵和盆腔环境造成一定的影响而 影响其生殖性能[3%4]。该研究结果也在提示手术 次数过高的供体，应该积极淘汰，不能再用于冲 胚，

会

生产

降低生产

。(下转29页）

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日龄就能到达到出生体重的2倍，由于这段时间 开始母乳已经完全无法满足羔羊生长发育的需 要，可以给羔羊补200 g以内的精料。

在羔羊达到30日龄之后，可以适当补充干 草，并且给羔羊提供足量的清洁温水。同时，还需 要减少哺乳的次数，让羔羊能够逐渐适应环境。 在此过程中，需要增加羔羊的运动量，用活动促进 羔羊的发育，并且提升羔羊的免疫力。

如果群体较大，可以将3日龄以内的羔羊和 母羊同圈；4〜7日龄可以5\"10只与母羊编人一 个群体$日龄以上的可以10只编人一个大群，对 20日龄以上的羔羊采取全部合群饲养的方法。 2.2.2 哺乳中期

哺乳中期指的是在40〜90日龄。在40日龄 以后，就可以从吃奶向草料转变，这样的状况要一 直维持到羔羊90日龄，期间，羔羊的饲料需要多 样化，选择优质的干草和青草为主，还可以给羔羊 喂食一些胡萝卜，保证羔羊能够获得丰富的营养， 并且能够方便羔羊采食。同时，还需要逐渐固定 饲喂饲料的时间和投料次序。由于此时羔羊还需 要进行一定的哺乳，就需要在早中晚各进行一次 初乳喂食。在此期间，还需要注意羔羊的生长发 育情况，对于一些体弱的羔羊需要进行特殊照顾。 2.2. 3 哺乳后期

哺乳后期指的是在90\"120日龄的羔羊，这 时的羔羊要

料为主，

的

。

此阶段，羔羊白天可以不和母羊在一起，可以进行

单独放牧，放牧的过程中可以适量补充一些干草 和青绿饲料，并且，还需要保证饲料的影响，饲喂 胡萝卜等碎渣，给羔羊提供更多的营养。120曰龄 后可以开始断奶，一般采用逐渐断奶的方法，白天 不见母羊，夜晚和母羊合群。2.3

断奶期的羔羊饲养

羔羊断奶后就进人了育肥期，一般体重都可 以达到25 kg左右，一般日增重可以达到200 g以 上，1.5〜2个月高强度育肥就可以达到屠宰体重 标准[3]。在进人6月龄后，日增重开始下降，这时 的料肉比开始降低，使得育肥效果变差。一般需 要每天喂投精饲料200 g，在7天之后开始提高饲 料量，从而促进羔羊生理机能的转变，提高增肥 度。

3结束语

羔羊 不

的生

不

，

要

根据不同的需求，在投料、放牧等方面进行不同的 安排，同时，还需要保证羊舍的清洁，避免随意的

， 提高

参考文献：

。

)]阿不都热西提•牙生.浅析羔羊的饲养管理）].今日

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(上接15页）

利用腹腔镜对肉羊供体母羊实施微创手术， 借助自制的冲胚针和回卵管，对供体母羊进行非 开放性腹腔内冲胚，从而有效回收肉羊体内胚胎 技术。突破了传统的供体母羊因冲胚手术将子 宫、输卵管、卵巢暴露于腹腔外，造成黏连不孕不 育的技术瓶颈，使供体母羊不孕不育率由30@将 至1@以下。利用腹腔内窥镜观察卵巢排卵情况， 从腹腔内取出子宫尖端进行冲胚的方法。现行的 手术法采集绵羊胚胎的技术必须把生殖道从腹腔 内取出，易引起术后粘连，在重复手术后引起胚胎 产量明显下降。随着腹腔内窥镜的使用而建立的 非手术采胚技术，使同一母羊在几次采胚后不产 生术后粘连。用完全手术的方法采集胚胎第一次 冲胚一般能确保80%以上的胚胎回收率，但以后 由于手术造成的粘连使一些优质母羊的重复冲胚 大打折扣。相反，完全的腹腔内窥法采集胚胎，一

般只有2%的母羊由于粘连而不能再冲胚。对羊

腹腔 窥镜技术采集羊胚

&胚

回收 手

术法两者间无显著差异。利用腹腔镜技术进行冲 胚、移植，能克服常规手术操作中所引起的感染等 缺点。参考文献:

[1] 张果平，王金文，王德芹，等.影响杜泊绵羊超数排卵效 果的因素分析）].江苏农业学报，2008,24(3): 293 — 297

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[3] 郭宪，程胜利，杨博辉，等.影响肉羊胚胎移植效果的因 素分析[C]//《2008中国羊业进展》论文集.盖州：第五 届中国羊业发展大会，2008:3.[4] 权富生.山羊和绵羊超数排卵及规模化胚胎移植技术 研究[D].杨凌：西北农林科技大学，2010.