维普资讯 http://www.cqvip.com ２０ｏ７年８月第ｌ１卷第８ 文章编号：１００７—４２８７（２ｏｏ７）０８—０９９９—０４ 苯乙酸对大肠癌细胞ＨＣＴ一８的诱导 分化作用研究 张广，姜 涛，卜丽莎，高 申，王巍，田 宇 （吉林大学中日联谊医院，吉林长春１３００３３） 摘要：目的探讨苯乙酸对大肠癌细胞株ＨＣＴ－８的诱导分化作用。方法应用［３ＨＩ—ＴｄＲ掺入法与细胞计数法、 流式细胞技术、电子显微镜检测ＰＡ对大肠癌细胞ＨＣＴ－８增殖的抑制作用、细胞周期各时相及其超微结构的变化。结 果ＨＣＴ－８细胞增殖抑制率与ＰＡ剂量呈显著正相关关系；应用ＰＡ后，ＨＣＴ－８细胞增殖抑制于Ｇｏ／Ｇ￣期，大量细胞堆 积于Ｓ期末期，不能完成全部ＤＮＡ合成，细胞核变规整，细胞质增多。结论ＰＡ对大肠癌ＨＣＴ－８细胞存在时间和剂 量依赖性增殖抑制作用，可提高大肠癌细胞ＨＣＴ－８的分化程度，具有广阔的临床应用前景。 关键词：苯乙酸；大肠癌；ＨＣＴ－８细胞株；诱导分化 中图分类号：Ｒ７３５．３ ４ 文献标识码：Ａ Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＺＨＡＮＧ Ｇｕａｎｇ，ＪＬ４ＮＧ Ｔａｏ，ＢＵＩＡｓｈａ，ｅｔ ．（Ｃｈｉｎａ－Ｊａｐａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃ 肌１３００３３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ｐｈｅｎｙｌａｅｅｔａｔｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｉｔｏｎ Ｏ１１ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏ— ｌｉｆｅｒａｉｔｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｆｏ ｌ３ ＨＪ—ｈｔｙｍｉｄｉｎｅ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｎａｄ ｃｅｌｌ ｏｃｕｎｔ，ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｎａｄ ｓｕｐｅｒ－ｍｉｃｒｓｏｔｍｃｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｅｌｃｅｔｒｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ ａ ｃｌｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｆｆｃｅｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｄｏｅｓ ｆｏＰＡ ｎａｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｉｔｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆｏＨＣＴ－８ ｃｅｌｌ，ｈｔｅ ｅｐｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆＨＣＴ－８ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｇ０／Ｇｌ ｐｈａｓｅ ａｎｄ Ｇ２＋Ｍ ｐｈａｓｅ ｒｄｅｕｃｅｄ ｓｉｃｎｉｔｌｃａ￣ｔ，ｔｙ ｎａｄ Ｓ ｐｈａｓｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ．Ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｈａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ｉｒｒｅｇｕｌａｒ ｓｈａｐｅ ｔｏ ｍｔｍｄｏｉｄ ｓｈａｐｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｍｏｎｓｅｍｔｄｅ ｈｔａｔ ＰＡ ｈａｖｅ ａ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｄｏｅｓ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｉｔｉｆｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ Ｃａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｌｎｏｒ ＨＣＴ－８ ｃｅｌｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｈｅｎｙｌａｅｅｔａｔｅ；ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ；ＨＣＴ－８ ｃｅｌｌ；ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ （Ｃｈｉｎ ＪＬａｂ脚，２００７，１１：９９９） 大肠癌是人类常见恶性肿瘤之一，在全世界范 １．２诱导剂 围内，年发病超过５００ ０００人，癌症死亡原因位于第 苯乙酸（Ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ，ＰＡ）分子式Ｃ８Ｈ８０２，分子 ２位，发病率有明显上升趋势…。国内外学者公认， 量１３６．１５，结构式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＯＯＨ，又名苯醋酸。 诱导分化疗法可促进肿瘤细胞向高分化方向转化， １．３细胞增殖检测 降低恶性度，控制其转移和复发。因此，诱导分化疗 苯乙酸对ＨＣＴ－８细胞的增殖率的影响采用细胞计 法及其机理的研究，成为目前抗癌研究的热点之一。 数法及［０Ｈ］．ＴｄＲ掺人法检测，台盼蓝染色判定细胞活 苯乙酸是作用极强的诱导分化剂，对各种癌细胞系 性。消化培养瓶中处于对数生长期的ＨＣＴ－８细胞，接 均有不同程度的生长抑制作用［ ，０，引，且在治疗剂量 种于２４孔培养板中培养，１×１０５细胞／孔。２４ ｈ改换培 范围内对人体无毒副作用，有广阔的临床应用前景。 养液，分别加入苯乙酸（ＰＡ）Ｏ、１．０，２．０、４．０ ｒｒ￣ｎｏｌ／Ｌ，分别 １材料与方法 于第２４、４８、７２、９６ ｈ，每组消化３复孔细胞，台盼蓝染色 １．１细胞株及体外培养 判定细胞涪『生后，光镜下用细胞计数板计数（７２ ｈ更换 肠癌细胞株ＨＣＴ．８由吉林大学中日联谊医 一次培养液）。ＰＡ的浓度梯度同上，培养４８ ｈ、９６ ｈ，终 院中心实验室提供，从美国ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ．Ｄ．） 止培养８—１２ ｈ前，每孔加入１．２５ Ｃｉ［０Ｈ］．ＴｄＲ，每组设 购回冻存。复苏后放人２５ ｒｎｌ培养瓶中单层培养， ３复孔。收集细胞于玻璃纤维滤膜上，蒸馏水冲洗，干 混匀后封口，置于３７℃，体积分数为５％的ｃ０２恒湿 燥后放人液体闪烁瓶中，加入３ ｎｄ闪烁液，２ ｈ后用液 培养箱中。培养基使用含有１０％胎牛血清（ＦＣＳ）的 体闪烁计数器测ＣＰＭ值。 ＩＭＤＭ培养基（美国ＧＩＢＣＯ公司），含ＮａＨＣＯ３２ ｇ／Ｌ， １．４流式细胞术分析细胞周期 青霉素１００ Ｕ／ｍｌ，链霉素１００ ｖ＃ｍｌ。 ＨＣＴ－８细胞接种２５培养瓶中，１×ｌＯｓ细胞／培 维普资讯 http://www.cqvip.com 一１０００一 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉａｂ Ｄｉａｍａ，Ａｕ￣￣ｕｓｔ。２ｏ（）７。Ｖ０Ｉ １１．Ｎｏ．８ 养瓶。２４ ｈ后更换培养液，分别加入ＰＡ ０、１．０、２．０ ｍｍｏｌ，在第２４、７２ ｈ用０．２５％的胰酶消化细胞。经 流式细胞仪的荧光激发分类器分析细胞周期比率。 １．５电子显微镜观察细胞超微结构 虹８０ ７０ ６０ ５０ 晷４０ ＨＣＴ－８细胞在２５培养瓶中传代培养，分别加入 ＰＡ ０、１．０、２．０、４．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，分别在第２４、７２ ｈ用 ０．２５％的胰酶消化，消化后２ ０００ ｒｐｍ离心１０分钟， 取离心管底部细胞团块切成约１ 大小，戊二醛 固定后，再用２％的四氧化锇（溶于０．１ ＭＮａＨＣＯ３缓 鄯 １０ ０ 蠹 龄 ０ ０ 冲液）固定２ ｈ，缓冲液冲洗，用ＰＨ为５．０的０．１％ 醋酸双氧铀整块酶染过夜。清洗两次脱水Ｅｐｏｎ包 埋。在不同平面切取标本切片，保证获取最大面积 的标本。随机拍摄电镜照片，观察细胞超微结构。 １．６统计学分析 所有的图表中数据用均数或均数±标准差的形 式表示。两两比较用ｔ检验，Ｐ＜０．０５被认为是差 异有显著性。 ２结果 ２．１．ＰＡ对ＨＣＴ－８细胞数及ＤＮＡ合成的抑制 ［０Ｈ］一ＴｄＲ掺入法与细胞计数法显示：ＨＣＴ－８细胞 ＤＮＡ合成减少及增殖抑制率与ＰＡ剂量呈显著正相 关关系；ＨＣＴ－８细胞增殖数目与ＰＡ剂量呈负相关关 系：ＰＡ组用药４８ ｈ：ｒ＝一０．９４２，Ｐ＝０．００１ ５，用药９６ ｈ：ｒ＝一０．８８１ ４，Ｐ＝０．（１０８；应用ＰＡ４．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，２４ ｈ， ＨＣＴ－８细胞无生长，在此浓度呈细胞毒性作用。 ２．２ ＰＡ对ＨＣＴ．８细胞周期的影响 应用流式细胞仪定量分析发现：用药２４ ｈ，ＰＡ １．０ ｍｍｏｌ／Ｌ组及２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ组，均无明显改变；用 药７２ ｈ，ＰＡ １．０ ｍｍｏｌ／Ｌ组Ｇ０／Ｇ１期、Ｇ２＋Ｍ期比例 下降，ｓ期比例升高；ＰＡ ２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ组，Ｇ０／Ｇ１期比 例显著下降，Ｓ期比例显著升高，见图１、图２。 ２．３ ＰＡ对ＨＣＴ－８细胞形态及超微结构的影响 ７０ 丑 ｝Ⅲ 匪 爱 １Ｏ Ｏ ＰＡ浓度（ｍｍｏｌ／Ｌ） 图１ ＰＡ作用２４小时细胞周期比例 ＰＡ浓度（ｍｍｏｌ／Ｌ） 图２ ＰＡ作用７２小时细胞周期比例 应用电子显微镜发现：苯乙酸使大肠癌细胞 ＨＣＴ－８细胞核由代表恶性的不规则畸形核变为代表 分化程度提高的、规整的类圆形核，细胞质变丰富。 高倍镜下见：胞浆中粗面内质网大量增生，上面附有 整齐排列的核糖体，见图３—６。 未用药处理的ＨＣＴ－８细胞，×４ ０００；细胞表面可见微绒毛结 构，核呈极不规则型，胞核表面见多个切迹 图３透射电镜观察未用药大肠癌细胞ＨＣＴ－８的超微 结构 ３讨论 本实验通过［ Ｈ］一ＴｄＲ掺人法、细胞计数法研究 证实，ＰＡ在细胞水平对大肠癌细胞ＨＣＴ－８的增殖有 极强的抑制作用。ＰＡ对大肠癌细胞ＨＣＴ－８存在时 间和剂量依赖性增殖抑制作用。用药后，大肠癌细 胞ＨＣＴ－８每分钟同位素脉冲数（ＣＰＭ）明显降低，说 明肿瘤细胞ＤＮＡ合成总量明显减少。本试验与 维普资讯 http://www.cqvip.com ・－－——国 １００１‘＿＿—— ． 蠡 ’，麓０ 善 ｜ 饕雩≥’ 、 ’、沁 嘲艇隧鳃髑｜ｉ； ｊ二 一圈盈圈图 ｅｏｔｏｌ／Ｌ７２ ｈ后的ＨＣＴ－８细胞， 应用ＰＡ２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ ７２ ｈ后的ＨＣｆ－８细胞， 应用ＰＡ２．０ ｒ×１０ ＯｏＯ；核型规整，胞质内可见大量线粒体 ×６ ０（３０；细胞表面微绒毛脱落，核形规则，核膜 清晰，核内染色质分布均匀，核仁明显胞质内 粗面内质网呈规则排列，可见一些空泡状结构 ０ ｍｍｏｌ／Ｌ作用 图５透射电镜观察ＰＡ２．０ ｎｍ￣ｌ／Ｌ作 图６透射电镜观察ＰＡ２．用后大肠癌细胞ＨＣＴ－８的超微 结构变化 后大肠癌细胞ＨＣＴ－８的超微结构 变化 Ｉｊ等［ ］等应用ＰＡ诱导分化胶质瘤细胞ＤＡＯＹ、Ｄ２８３一 关。在肿瘤细胞和胚胎细胞中，核孔可占细胞膜总 ＭＥＤ及田宇［ ］等应用ＰＡ诱导分化胶质瘤细胞Ｃ６ 面积的５０％。ＰＡ减少ＨＣＴ－８细胞核孔数目，使细胞 细胞系，得出的结论相一致。 近年来，国内外越来越多地重视从细胞周期角 明［ ，诱导分化剂并不能改变细胞周期的长短，其作 用形式为减少进入细胞周期的细胞数，并使进入细 核形状趋于正常化，有利于细胞的遗传信息按接近 正常的方式传递。且在高倍电子显微镜下观察到应 化。Ｅｎｅｎｋｅｌ［ ］证实多种蛋白酶的蛋白水解过程主要 发生于粗面内质网。由此可见，ＲＥＲ的数量与细胞 度来探讨诱导分化剂的作用机理。已有研究表 用ＰＡ后，ＨＣＴ－８细胞胞浆中核糖体及内质网的变 胞周期的细胞阻滞于细胞周期的某一时相，使大量 蛋白质合成、脂类、糖类代ｉ身 功能有重要的关系。有 细胞在特定时相堆积，不能完成整个细胞周期的循 的学者因此提出，ＲＥＲ数量的多少代表细胞的分化 环，因而不能完成全部的ＤＮＡ复制。本实验通过 程度。本实验中应用ＰＡ后，大肠癌细胞ＨＣＴ－８中游 ＦＣＭ反复检测，证实ＰＡ显著降低ＨＣＴ－８细胞周期 离核糖体明显减少，ＲＥＲ数量明显增加，且附有大量 中Ｇｎ／Ｇ。比例，显著提高了ｓ期比例，表明：应用ＰＡ 核糖体。这些表明：ＰＡ提高了ＨＣＴ一８细胞分化程 后，ＨＣＴ－８细胞增殖抑制于Ｇｏ／Ｇ 期，大量细胞堆积 度。 于Ｓ期末期，不能完成全部ＤＮＡ合成。 肠癌ＨＣＴ－８细胞核的形状表现为胞核极不规整，核 上述结果为研究苯乙酸对大肠癌的诱导分化作 本实验应用电子显微镜观察到，应用ＰＡ前，大 用奠定了一定理论基础，为苯乙酸在临床上应用，提 高大肠癌的疗效，提供了实验依据。 ［１］Ｊｅｍａｌ Ａ，Ｔｉｗａｒｉ ＲＣ，Ｍｒｒｒａｙ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ：Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，２００４，５４（１）：８． ［２］Ｖａｓｓｅ Ｍ，Ｔｈｌｂｏｕｔ Ｄ，Ｐａｙｓａｎｔ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉ）ｅｃｅａｓｅ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃ￣ｌｎｃｅｒ ｉｎ ｖａｓｉｖｅ— ｎｅｓｓ ｂｙ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ（ＮａＰＡ）ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ 凼ａｌｌ ｉｎｃｒｅｓｓｅｄ ｅｘ— 质比明显增大。应用ＰＡ后，细胞核突触减少，已接 参考文献： 近正常细胞，呈类圆形。胞核的突触减少，表明用药 后胞核表面积及核孔数随之减少。已知，核孔的作 用为选择性输送ＲＮＡ离开细胞核。其具体过程是 通过核孔将ｍＲＮＡ与蛋白质结合的ＲＮＡ蛋白质复 ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００１，８４（６）：８０２． ［３］Ｗａｔａｎａｂｅ Ｍ，Ｓｒｇａｎｏ Ｓ，Ｉｍａｉ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒｉｇｅｎｉｃｉｙ，ａｔｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｎｉｎｅ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＣＭ Ｂ２ 合体输出。Ｈｕｒｔ［８ｊ证实了不同表达的ｔＲＮＡ与核糖 体通过核孔向胞浆内输出的定量关系，提出核孔的 数量与细胞核中的ＲＮＡ的输出及细胞转录活性有 ｂｙ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ［Ｊ］．Ｒｅｓ Ｖｅｔ Ｓｅｉ，２００１，７０（１）：２７． 维普资讯 http://www.cqvip.com 一１００２一 Ｊ＇［ａｂ Ｄｉａｇｎ，Ａｕｇｕｓｔ，２００７，Ｖｏｌ １１，Ｎｏ．８ ［４ＪＧｅｒｖｅｌａｓ Ｃ，Ａｖｒａｍｏｇｌｏｕ Ｔ，Ｃａｂｉｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｇｒｏ￣ｈ ｉｎｈｉｂｉｉｔｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ 【７ ＪＲａｍＺ，ＳａｍｉｄＤ，Ｗａｌｂｒｉｄｇｅ Ｓ，ｅｔａ１．Ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｉｔｎｏ，ｔＵｌｌｌｏｒｍａｔｔｒｒａｔｉｏｎ． ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｌｌｎｌｏｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ（ＮａＰＡ） ａｎｄ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｔｎｏｌ￣ｉｎ ｒａｔｓ ｔｒｅａｔｄｅ ｔｈ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｄｅｘｔｍ￣ａｎｄ ｎｏｅ ＮａＰＡ－ｄｅｘｔｒａｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ［Ｊ］．Ａｎｔｉ—ｃａｎｃｅｒ ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９４，５４（１１）：２９２３． ｄｒｕｇｓ，２ＯＯ２，１３（１）：３７． １８ＪＨｕｒｔ Ｅ，Ｈａｌｌ／ｉｎｓ Ｓ，Ｓｃｈｒｎｅｌｚｌ Ｂ，ｅｌ：１ａ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｓｓａｙ ｒｅｖｅａｌｓ ｉｎｈｉｂｉ— ［５］Ｋ ＸＮ，Ｐａｒｉｋｈ Ｓ，Ｓｈｕ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｐｈｅｎｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ ａｎｄ ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｔｅ ｉｎｄｕｃｅ ｉｔｎｏ ｏｆ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｎｕｃｌｅａｒ ｅｘｐｏｒｔ ｉｎ ｒａｎ—ｃｙｃｌｅ ｎａｄ ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｉｎ ｍｕｔａｎｔｓ［Ｊ］． ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｏ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｄｕｎｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９９９，１４４（３）：３８９． 【ＪＪ ａｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２ＯＯ４，１０（３）：１１５０． １９ＪＥｎｅｎｋｅｌ Ｃ，Ｌｅｈｍａｎｎ Ａ，ＫＩｏｅｔｚｅｌ ＰＭ，ｅｔ ａ１．ＧＦＰ－ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｏｆ ２６Ｓ ｐｍｔ￣ｔ ［６］田宇，赵丛海，陈宝琴，等．苯乙酸对脑胶质瘤细胞超微结构的 ｓｏｍｅ８ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｙｅａｓｔ：ｉｎｓｉｇｈｔ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｔ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅａｒ ｅｎ— 影响［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０００，１７：３７２． ｖｅｌｏｐｅｔｈｒｏｕｇｈ ＥＲ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｐ，１９９９，２６（１－２）：１３１． （收稿日期：２００６—１２—１９） 文章编号：１００７—４２８７（２００７）０８—１００２—０３ 土贝母制剂诱导Ｔｃａ８ １ １ ３细胞凋亡 及其对细胞周期各时相的影响 刘晓红 ，陈洪胜 ，刘牧 ，曹志平 （１．北京市消防总队医院，北京１０００３５；２．吉林大学第二医院；３．吉林省肿瘤医院） 摘要：目的探讨土贝母制剂对Ｔｃａ８１１３细胞（人舌癌细胞株）诱导分化机制，为舌癌治疗提供依据。方法应用 ￣ｒｒｒ（塞唑蓝）比色法和流式细胞仪检测不同浓度的土贝母制剂对Ｔｃａ８１１３细胞增殖抑制率及细胞周期各相的变化和 凋亡率，并通过电子显微镜观察其亚细胞结构改变。结果土贝母制剂对Ｔｃａ８１１３细胞细胞增殖有明显的抑制作用， 且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析Ｇ１期细胞增多，ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞相对增多，亚细胞结构，细胞空化。线 粒体肿胀，染色质趋边凝集。结论土贝母制剂能够抑制Ｔｃａ８ｌｌ３细胞增殖，阻止Ｇ１期细胞向ｓ期的转化进程，诱导 Ｔｃａ８１１３细胞凋亡。 关键词：土贝母；Ｔｃａ８１１３细胞；细胞周期；凋亡 中图分类号：Ｒ９７９．１ 文献标识码：Ａ Ｒｈｉｚｏｎｌａ Ｂｏｌｂｏｓｔｅｍａｌｉｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎｄｕｃｅ １１３ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｏｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｄｉ ｒｅｔ ｐｈａｓｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ＬＩＵＸｉ，ａｏ－ ｈｏｎｇ，ＣＨＥＮＨｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＬＩＵＸｉａｏ，ｅｔ ａ１．（＆ 凡ｇ Ｘｉａｏｆａｎｇ Ｚｏｎｇｄｕｉ Ｙｉｙｕａｎ，Ｂｅ￣ｉｉｎｇ １００３５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｄｉｓｃｕｓｓ Ｒｈｉｚｏｍｅ Ｂｏｌｂｓｔｅｍａｔｉｓ，ｓ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ Ｔｃａ８１１３ ｃｅｌｌ，ｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｉｔｏｎ—ｉｎ ｄｕｃｅｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｓｕｐｐｏｒｔ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌｏｓｓａｌ ｃａｚｃｉｎａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ａｐｐｌｙ ＭＭＴ ｅｏｌｏｕｒｍｅｔｒｉｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｔｏ ｔｅｓｔ Ｒｈｉｚｏｍａ Ｂｏｌｂｏｓｔｅｍａｔｉｓ， Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔｄｅｎｓｉｔｙｔｏＴｃｂ８ｌ１３ ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ—ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ａｎｄｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｈａｓｅｓｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｃｅ ｉｔｓ ｃｈａｎｇ￣ｏｆ ｓｕｂｃｅｌｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｌｅｃｔｒｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｒｈｉｚｏｍａ Ｂｏ；ｂｏｓｔｅｍａｔｉｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｗｎ ａｐ— ｐａｒｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ Ｔｃｂ８１ １３ ｃｅｌｌ，ｓ ｐｍｌｉｆｅｍｔｉｏｎ ａｎｄ ａｒｅ ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ａｎａｌｙｓｅｓ ｔｈａｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｒｅｓｅｄｉｎｇ ｐｔｍｓｅ Ｇ１，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｐｈａｓｅｓ ｎａｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｐｄ ａｐｐｅｍｕｔｌｙ ｉｎ ｐｈａｓｅ Ｇ２／ｎｌ，ａｎｄ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃａｖｉｔａｔｉｏｎ ｍｌｔｃｏｈｏｎｄｒｉｏｓｎ ｓｗｅｌｌ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ ｃｌｏｇ ｅｄｇｅ ｔｅｎｄｅｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＲＩｄｚｏｍａ Ｂｏｌｂｏｓｔｅｍａｔｉｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ Ｔｃａ８１ １３ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ ａｎｄ ｂｌｏｃｋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｈａｓｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｍｉｎｇ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｓ，ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ Ｔｃａ８１１３ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ￣ｒｂ＿ｉｚｏｍａ ｂｏｌｂｏｓｔｅｍａｔｉｓ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌ；ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ （Ｃｈｉｎ ＪＬａｂ脚，２ＯＯ７，１１：ｌＣＸｒ２） 近年来，从天然植物中寻找毒副作用小，安全有 点，观察不同浓度的土贝母制剂对其增殖细胞周期 效的抗肿瘤药物成为研究的热点［¨，土贝母为葫芦 各相的变化及凋亡的发生率，旨在为人舌癌的治疗 科植物，属于清热解毒药，中药典籍称其可用于乳腺 提供理论依据。 癌和鼻咽癌的治疗［２＿。本研究以Ｔｃ ８１１３细胞为靶 １材料与方法 １．１材料 基金项目：吉林省科技厅重点项目（编号：２００４０４０１—５）；吉林省科委资 助项目（编号：２００４０４１１—１） １．１．１ Ｔｃａ８１１３细胞由北京医科大学口腔医院提
